Анализ крови на анф расшифровка. АНА (антинуклеарные антитела)

Системные ревматические заболевания
Антинуклеарный фактор (АНФ) и тип свечения

Определение антинуклеарного фактора (АНФ) представляет собой основной метод выявления антинуклеарных антител, который позволяет выявить большинство разновидностей антинуклеарных антител, включая аутоантитела к нуклеиновым кислотам (дсДНК, осДНК, РНК), конформационным и нерастворимым антигенам. Результатом определения АНФ является факт присутствия аутоантител в диагностическом титре, конечный титр разведения сыворотки, отражающий аффинность и концентрацию аутоантител, а также тип свечения ядра клетки (тест 01.02.15.005) . Характеристики конкретной методики зависят, прежде всего, от выбора субстрата, который может варьировать от криосрезов (крысиных печени или почки) до культивируемых пролиферирующих клеточных линий (Hep2, Kb, HeLa), а также метода фиксации ткани, который может влиять на сохранность ряда ядерных антигенов АНА.

История разработки тестов для выявления антинуклеарных антител:

Начало ХХ века — «гиалиновые тельца» в цитоплазме лейкоцитов

1948 год Hargraves, Richmond, Morton — метод обнаружения LE-клеток invitro при длительной инкубации лейковзвеси больных СКВ

1951 год Lee, Michael, Vural — обнаружили сывороточный фактор, стимулирующий фагоцитоз ядер лимфоцитов лейкоцитами периферической крови

1957 год Holoborow, Weir, Johnsonиспользовали метод непрямой иммунофлюоресцнеции, разработанный Coons в 1950 для выявления АНФ на криосрезах печени человека

1961 год Beck — использовал ткани лабораторных животных

1982 год Tan — использовал перевиваемую клеточную линию человека HEp-2, этот тест стал золотым стандартом выявления АНА

1958 год Jones — обнаружил в крови больных синдромом Шегрена фактор, способный преципитировать экстракты ядер клеток, что послужило толчком для описания большинства разновидностей антинуклеарных антител

Непрямая иммунофлюоресценция на перевиваемой клеточной линии Нер2

Метода выявления АНФ был разработан Таном (Tan, 1982), применившим в качестве субстрата человеческую перевиваемую эпителиоидную клеточную линию HEp-2 (ATCC ref.no. CCL-23). Это клеточная линия, полученная из аденокарциномы гортани человека, представляет собой крупные полиплоидные неороговевающие плоские эпителиоциты, образующие монослой на пластике и стекле.

Рисунок: клетки клеточной линии НЕр-2, окрашенные гематологическим красителем.

Сравнительная неприхотливость этой линии, крупные ядра и присутствие всех человеческих антигенов сделало метод непрямой иммунофлюоресценции с использованием перевиваемой клеточной линии НЕр-2 основным методом обнаружения АНФ. В англоязычной литературе отсутствует единое название для этого метода, иногда этот метод для краткости обозначают как FANA(Fluorescent AntiNuclear Antibody detection). Отсутствие единства номенклатуры породило путаницу в названии лабораторных тестов. Иногда под термином «антинуклеарные антитела» иммунологические лаборатории называют тесты, как основанные на методах иммуноферментного и иммунохимическом анализе, так и метод иммунофлюоресценции. В русскоязычной литературы мы считаем необходимым сохранить отечественное название этого показателя - «антинуклеарный фактор» (АНФ), чтобы отличить иммунофлюресцентный метод от других тестов для обнаружения АНА.

Необходимо выявлять АНФ класса IgG, так как выявление АНФ, представленных другими классами иммуноглобулинов не имеет самостоятельного диагностического значения. Стандартные разведения сыворотки больного инкубируются с тканевым субстратом, что позволяет антинуклеарным антителам из сыворотки больного связаться с соответствующими ядерным мишенями. После этого места связывания аутоантител детектируются с помощью античеловеческой антисыворотки, меченной флюоресцеином.

Хотя в качестве субстратов могут применяться и другие человеческие клеточные линии, однако благодаря хорошей морфологии и удобству культивирования именно линий Нер-2 стала общепризнанным субстратом непрямой иммунофлюоресценции. Ее применение улучшает чувствительность теста за счет яркой флюоресценции даже при значительных разведениях сыворотки больного, а большое, богатое эухроматином ядро позволяет точно описать тип свечения. Кроме того, применение клеточной линии Hep-2 способствует обнаружению антител Ro/SS-A, а также антител к антигенам ядрышка, которые плохо при использовании криосрезов ткани лабораторных животных. Среди других преимуществ HEp-2 можно отметить высокую частоту деления клеток, позволяющую выявлять антитела к антигенам, экспрессирующимся только при делении клетки, и отсутствие клеточного матрикса ткани, затрудняющего визуализацию специфического свечения при сравнении с гистологическими срезами.

Титры антинуклеарного фактора

Титр АНФ определяется как последнее разведение сыворотки больного, которое обладает четкой флюоресценцией ядер клеток. При использовании тканей лабораторных животных диагностический титр АНФ составляет 1:8-1:10, в то время как при использовании клеточной линии НЕр-2 рекомендуется использовать исходный титр 1:80. В этом случае в норме титры АНФ менее 1:160.

При использовании титров менее 1:160 частота слабоположительных результатов у клинически-здоровых лиц составит не более 5%, и в то же время не позволит пропустить значимые титры АНА у больных диффузными болезнями соединительной ткани.

Для определения конечного титра обычно используется титрование шагом х2 (1:160-1:320 - 1:640 - 1:1280 - 1:2560 - 1:5120 и т.д. Может использоваться и более грубое титрование. На фоне обострения ревматических заболевания обычно отмечаются титры АНФ более 1:640, а при ремиссии титры снижаются до 1:160-1:320.

Существуют рекомендации по бальной оценке результатов выявления АНФ, указыващей содержание «в крестах». Это позволяет лабораториям экономить реактивы и уменьшить трудозатраты на выполение исследований. В этом случае определение конечного титра не представляется возможным. Необходимо учитывать, что конечный титр имеет более важное значение, по сравнению с количеством связавшихся с субстратом аутоантител, так как непосредственно связан с аффинностью их взаимодействия с антигеном. Желательно определять конечный титр у всех положительных больных, что позволяет уточнять присутствие в сыворотке высокоаффинных аутоантител, которые более тесно связаны с активностью процесса.

Тип свечения ядра антинуклеарного фактора

Уже в первом опыте клинического применения непрямой иммунофлюоресценции для выявления АНФ с использованием криосрезов тканей лабораторных было отмечено, что сыворотка больных с аутоиммунными заболеваниями заболеваниями по разному «окрашивала» ядра клеток, что приводило к селективному свечению некоторых структур ядра. Уточнение этого феномена привел к описанию так называемых «типов свечения» ядра в иммунофлюоресцентном тесте. Это связано с тем, что каждая разновидность АНА имеет конкретные клеточные мишени, вследствие чего тип свечения ядра, ядрышка и цитоплазмы клетки отражает взаимодействие АНА сыворотки больного с антиген-содержащими структурами внутри клетки. Тип свечения зависит от присутствия конкретных аутоантител в сыворотке крови больного, на основе чего, можно сделать предварительное заключение относительно тех разновидностей АНА, которые имеются в данной сыворотке. Однако применение гистологических срезов тканей лабораторных животных не позволяет достоверно установить тип свечения. В то же время использование перевиваемых клеточных линий, таких как Нер-2 позволяет описать значительное количество вариантов окрашивания ядра и цитоплазмы. Существует три основные группы антигенов, присутствие антител к которым определяет различные типы свечения:

Тип свечения ядра клетки значительно увеличивает информативность выявления АНФ, в связи с чем, должен рутинно определяться при определении этого показателя. Использование клеток линии НЕр-2 позволяет охарактеризовать более 20 различных вариантов окрашивания ядра, которые зависят от спектра АНА, присутствующих в исследуемой сыворотке. Однако для практической лаборатории достаточно различать 6 основных вариантов свызывания аутоантител с антиген-содержащими структурами клетки.

Выделяют гомогенный, периферический, гранулярный (мелко-/крупно-), ядрышковый, центромерный и цитоплазматический типы свечения ядра. Каждому типу свечения присущи очень характерные признаки, которые позволяют отличить один вариант от другого, а также набор антигенам, с которыми реагируют аутоантитела в сыворотках больных. Описание типов свечения представляет ценную клиническую информацию само по себе, кроме того, тип свечения может указывать на необходимость проведения определенных лабораторных тестов в дальнейшем.

При гомогенном типе свечения аутоантитела реагируют с теми антигенами, которые распределены в ядре диффузно, т.е. входят в состав хроматина. Характерно, при обнаружении гомогенного типа свечения, в делящихся клетках ярко окрашиваются конденсированные хромосомы. Основными структурными единицами хроматина являются нуклеосомы - комплексы ДНК и гистонов. Таким образом, гомогенный тип свечения предполагает наличие антител против нуклеросом, дсДНК и антител к гистонам. Он встречается у больных с СКВ и лекарственной волчанкой, а также у больных со склеродермией. Обычно обнаружение высокого титра АНФ с гомогенным типом свечения указывает на диагноз СКВ.

Периферический тип свечения часто выделяют отдельно, хотя он является разновидностью гомогенного типа свечения. Его выявление является артефактом фиксации клеток, что приводит к перераспределению хроматина в ядре на периферию. Важно отличать периферический тип свечения от окрашивания ядерной мембраны, которое отмечается при аутоиммунных заболеваниях печени. Периферический тип свечения обнаруживается у больных с антителами к двуспиральной ДНК и выявляется преимущественно у больных с СКВ.

Гранулярный тип является наиболее частым встречающимся и, одновременно, наиболее неспецифическим. Иногда этот тип свечения в отечественной литературе называют «крапчатым» или «сетчатым». Название «гранулярный» более точно отражает этот феномен, так как в этом случае аутоантитела реагируют с гранулами в ядре, представляющими надмолекулярные нуклеопротеиновые комплексы. Такие комплексы белков и нуклеиновых кислот осуществляют в ядре ряд функций, необходимых для нормального функционирования клетки. К таким комплексам, в частности, относятся сплайсосомы, которые осуществляют посттранскрипционную перестройку мРНК, необходимую для синтеза белка на рибосомах. В составе присутствут множество различных нуклеопротеинов, что обуславливает многообразие антигенных мишеней при обнаружении гранулярного типа свечения. К основным аутоантигенам, антитела к которым приводят к визуализации гранулярного типа свечения, относят Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B антигены и PCNA. Клетки в процесс деления утрачивают большинство сформированных нуклеопротеиновых комплексов, поэтому митотические фигуры в клеточной линии при гранулярном типе свечения не окрашиваются. Гранулярный тип свечения ядра отмечается у больных при СКВ, СШ, СС, ДМ/ПМ, РА и ряда других аутоиммунных заболеваниях. Низкие титры АНФ с гранулярным типом преобладает в сыворотках крови у клинически здоровых лиц с АНФ без признаков системного заболевания.

Выявления очень высоких титров АНФ (1:2560-1:10000) с крупногранулярным типом свечения ядра обычно указывает на диагноз смешанного заболевания соединительной ткани и требует дообследования для выявления RNPантигена, который является основным серологическим маркером этого заболевания.

Антигены ядрышка могут выступать в качестве мишеней АНА, что приводит к обнаружению ядрышкового типа флюоресценции. Выявление ядрышкового типа свечения характерно для склеродермии и ее разновидностей. Ядрышковый тип флюоресценции определяется у больных при наличии антител к компонентам ядрышка, таким как PHК полимераза 1, NOR, U 3 RNP, PM/Scl.

Центромерный тип флюоресценции отмечается при появлении антител к центромерам хромосом, и обнаруживается только в делящихся клетках. Его присутствие характерно при CREST варианте склеродермии.

Цитоплазматический тип свечения указывает на антитела к тРНК-синтетазам, в частности Jo-1, которые отмечаются при полимиозите. Кроме того, он выявляется у больных с АНА, направленными против других компонентов цитоплазмы клетки: антитела к актину при аутоиммунном гепатите, антитела к митохондриям при первичном билиарном циррозе.

Можно охарактеризовать ряд других разновидностей свечения, причем эти типы окрашивания ядра клеток могут быть характерны для конкретной разновидности АНА. Так антитела к Scl-70 в иммунофлюоресцентном тесте на HEp-20 клетках дают мелкогранулярное окрашивание ядра и ядрышек, анти-р80 - светящиеся точки в ядре, которые отсутствуют в митотических клетках. Однако необходимо указать на редкость и разнообразие таких феноменов, что делает излишним их выявление при рутинных исследованиях.

Нередко может встречаться сочетание нескольких типов свечения, например мелкогранулярного и ядрышкового, что характерно для антител к Scl-70. Более того, часто в низких разведениях преобладает один тип свечения, например гранулярный, а при дальнейших разведениях выявляется гомогенный или центромерный типы флюоресценции, что свидетельствует о наличии в сыворотке больного различных видов АНА. Хотя тип свечения дает врачу определенные данные в пользу того или иного диагноза, необходимо принимать во внимание сравнительно низкую его специфичность и разнообразие встречающихся феноменов, что требует дальнейшего лабораторного обследования.

Обнаружение АНФ является основой для использования других лабораторных тестов, уточняющих спектр АНА в крови больных. Учитывая крайнюю информативность этого теста, дальнейшее тестирование и анализ результатов последущего обследования должен интерпретироваться в зависимости от результатов оценки типа свечения и титра АНФ.

Хотя отсутствие значимых титров АНФ практически всегда исключает диагноз активного системного ревматического заболевания, но при использовании клеточной линии НЕр-2, у 2-4% больных, удовлетворяющих критериям для диагноза СКВ, АНА не определяются или титры низки. Этих больных иногда относят к группе «АНФ-негативной СКВ », для уточнения диагноза у таких больных требуется дальнейшее обследование, прежде всего выявление антител к SS-Aантигенам. Эти антигены обладают хорошей растворимостью и могут утрачиваться из ядер клеток. Для сокращения этой категории пациентов используется комплексное тестирование, включающее определение антител к экстрагируемым ядерным антигенам, так называемый «скрининг заболеваний соединительной ткани », тест 000723 . Отрицательный результат такого обследования позволяет с очень высокой вероятностью позволяет исключить диагноз СКВ и других системных ревматических заболевании.

Относящееся к группе больших коллагенозов, которое характеризуется диффузным поражением соединительной ткани и сосудов. Ранняя диагностика этой патологии является серьезной проблемой, так как СКВ может начинаться под «маской» других заболеваний. Поскольку СКВ является аутоиммунным заболеванием, то механизм его клинических проявлений, согласно современным представлениям, объясняется со следующих позиций:

• циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК), в состав которых входят антиядерные антитела, депонируясь в микроциркуляторном звене, приводят к развитию васкулопатий и повреждению тканей;
• аутоантитела к клеткам крови приводят к лейко-, лимфотромбопении и анемии;
• антифосфолипидные антитела приводят к развитию антифосфолипидного синдрома (АФС).

Современные методы иммунологической лабораторной диагностики позволяют идентифицировать все компоненты патогенеза СКВ и тем самым с необыкновенной, практически 100% точностью, верифицировать диагноз заболевания. Вместе с тем наличие любых изменений в анализах позволяет их интерпретировать только с учетом индивидуальной клинической картины.

Следует отметить, что прежний способ диагностики СКВ по наличию в крови LE-клеток не выдержал испытание временем, показав крайне низкую чувствительность и специфичность, в связи с чем от него отказались. LE-клетки даже не включены в систему критериев СКВ.

Основными маркерами СКВ являются:

Показания для назначения анализа крови на маркеры системной красной волчанки

• кожная волчанка;
• лекарственная волчанка;
• тромбоцитопеническая пурпура;
• эритродермия;
• тяжелые поражения печени;
• CREST синдром;
• полимиозит;
• дерматомиозит;
• хронический ювенильный артрит;
• аутоиммунный гепатит;
• склерозирующий холангит;
• полинейропатии;
• миелит;

Как проходит процедура?

Забор крови осуществляется из локтевой вены натощак утром.

Подготовка к анализу

Волчаночный антикоагулянт

Волчаночный антикоагулянт (ВА, Lupus anticoagulants, LA) один из важных скрининговых и подтверждающих тестов диагностики АФС. ВА образуются в организме в результате развития аутоиммунных процессов после инфекционных воздействий и подавляют в крови реакцию превращения протромбина в тромбин. При выявлении этих антител в крови по удлинению коагуляционных тестов, их определяют как «волчаночный антикоагулянт».

Положительный результат:

• опухоли;

Антинуклеарный фактор

Антинуклеарный фактор на клеточной линии НЕр-2 (АНФ HEp-2, титры; ANA IF, titers). Положительный результат АНФ отмечается более чем у 90% больных с СКВ и кожными формами этого заболевания, склеродермии , смешанном заболевании соединительной ткани , синдроме Шегрена . Результатом определения АНФ является титр, представляющий собой значение конечного разведения сыворотки, при котором сохраняется значимая флюоресценция ядра. Чем выше знаменатель дроби, тем больше разведение сыворотки, тем больше антител в сыворотке больного. Чувствительность этого теста для СКВ составляет 95%.

Высокие титры АНФ (1/640 и выше):

• высокая вероятность системного ревматического заболевания;
• высокая вероятность аутоиммунного заболевания печени;
• повышение титров АНФ в динамике указывает на обострение системного заболевания;
• при СКВ титр коррелирует с тяжестью заболевания и снижается при эффективной терапии.

Низкие титры АНФ (до 1/160):

• у 1-2% здоровых лиц;
• у родственников больных с системными заболеваниями;
• многие аутоиммунные , инфекционные и онкологические заболевания .

Антитела к нуклеосомам

Антитела к нуклеосомам (NCA) являются одними из первых, которые формируются в организме в ходе развития СКВ. Титры NCA коррелируют с активностью заболевания. Специфичность определения данных аутоантител для диагностики СКВ более 95%.

Расшифровка результата анализа

Высокое содержание антител к нуклеосомам (положительно):

• лекарственная волчанка;
• активная СКВ, сопровождающаяся нефритом.

• низкая вероятность СКВ;
• низкий риск поражения почек при СКВ.

Антитела класса IgG к двуспиральной ДНК

Присутствие антител класса IgG к двуспиральной ДНК (анти-дсДНК IgG; anti-dsDNA IgG) высокоспецифично для СКВ, в меньшей степени — при других диффузных болезнях соединительной ткани или лекарственно-индуцированной СКВ. Чувствительность теста для СКВ составляет 85%. Количественное определение анти-дсДНК IgG антител более всего подходит для мониторинга состояния, прогноза и контроля терапии у пациентов СКВ, так как коррелирует с ее активностью и тяжестью гломерулонефрита.

Расшифровка результат анализа

Повышение уровня:

• инфекция, вызванная вирусом Эпштейна-Барра;

Понижение уровня:

• норма.

Антитела к кардиолипину IgG

Антитела к кардиолипину IgG (aCL IgG) — один из видов аутоиммунных антифосфолипидных антител, включенных в патогенез антифосфолипидного синдрома. Их наличие в крови манифестируется пролонгированием фосфолипидзависимых тестов коагулограммы (протромбин, АЧТВ), что обозначают как «волчаночный антикоагулянт».

Расшифровка результата анализа

• лекарственная волчанка;
• гепатит С;
• бореллиоз;
• ВИЧ-инфекция.

Антитела к кардиолипину IgM

Антитела к кардиолипину IgM (aCL IgM) при их выявлении указывает на высокий риск развития СКВ; aCL IgM выявляются у 20-50% больных с системной красной волчанкой и 3-20% больных с другими системными ревматическими заболеваниями.

Интерпретация

Положительно (антитела обнаружены):

• гепатит С;
• бореллиоз;
• ВИЧ-инфекция;
• системные заболевания соединительной ткани.

Нормы

Антинуклеарные антитела — общее название группы антител направленных против различных компонентов клетки, появление их связано с аутоиммунными заболеваниями, преимущественно .

Синонимы: антиядерные антитела, антинуклеарный фактор, антиядерный фактор, антитела к экстрагируемым ядерным (нуклеарным) антигенам, antinuclear antibodies, Hep-2 substrate, ANA-Hep2, fluorescent antinuclear antibody detection, ANA, FANA

Антинуклеарные антитела — это

комплекс антител (более 200), преимущественно иммуноглобулины G (реже IgМ и IgА), появляются в результате нарушении механизма аутотолернатности при аутоиммунных и ревматических заболеваниях.

В некоторых случаях иммунный ответ направлен не против чужих, а против собственных тканей. В таком случае говорят о аутоиммунном заболевании . А антитела, которые вырабатываются к своим же клеткам или их компонентам называются аутоиммунными .

У большинства людей есть в крови незначительное(!) количество аутоантител, которые не являются проявлением болезни.

Только в случае серьезной поломки в иммунитете, уровень аутоантител становится повышенным и достаточным для постановки диагноза.

ANA может быть положительным еще до появления первых симптомов болезни. Около 95 % пациентов с системной красной волчанкой имеют в крови антиядерные антитела. Наличие симптомов волчанки подтверждает диагноз.

Механизм образования

• воздействие ультрафиолетовых лучей на кожу приводит к активации запрограммированной гибели клетки (апоптоза), что является нормальной реакцией организма, но при системных заболеваниях одновременно массово мигрируют
• ранее недоступные и невидимые для иммунной системы компоненты клетки, такие как ядрышки, гистоны, оболочка ядра и др. «оголяются», а макрофаги, вместо того, чтоб данный материал просто «утилизировать», передают сигнал о нем по цепочке иммунного ответа
• В-лимфоциты, в ответ на сигнал макрофага, начинают вырабатывают антиядерные антитела, которые связываясь с соответствующим антигеном формируют иммунные комплексы (ядерный антиген + антитело IgG, IgM, IgA)
• иммунные комплексы оседают на базальной мембране различных органов и тканей, особенно сосудов, активируют систему комплемента — местного воспалительного ответа
• в итоге — повреждение и нарушение функции органа

Антинуклеарные антитела направлены против различных структур нормальной клетки.

Виды антинуклеарных антител:

• anti-Ro (SS-A) — антитела к белкам связанным с РНК Y1-Y5 в сплайсосомах
• anti-Jo1 — антитела к цитоплазматическому антигену Jo-1
• anti-Sm
• anti-La (SS-B) — антитела к белку, связанному с РНК-полимеразой-3
• anti-Sci 70 — антитела к ядерной топоизомеразе
• anti-U1 RNP — антитела к U1 рибонуклеопротеину
• антицентромерные антитела
• антигистоновые антитела

Показания

• диагностика системной красной волчанки, синдрома Шергена

Системная красная волчанка

Системная красная волчанка - аутоиммунное заболевание соединительной ткани и сосудов. Это наиболее тяжелое заболевание соединительной ткани, при котором отмечаются резкие боли в суставах, поражение кожи («бабочка»), серозных оболочек, сердца, почек, нервной системы, легких, трофические нарушения.

Симптомы

• артрит — воспаление сустава, проявляться болью, отечностью, нарушением подвижности, покраснением кожи и повышением температуры над ним
• воспаление внешней оболочки сердца или плевры ( или ) неясного происхождения
• изменения в результатах ( , — белок или эритроциты в моче)
• — разрушение с повышением уровня
• тромбоцитопения — сниженное число в
• — сниженное число в
• кожные симптомы — сыпь, утолщение кожи, особенно после активного
• синдром Рейно — периодическое изменение цвета пальцев стоп и кистей ( , посинение и покраснение) с нарушением чувствительности и болью
• атипичные неврологические и психические симптомы
• повышение температуры тела, усталость, снижение веса,

Методы

Существует два метода определения антинуклеарных антител в крови.

Непрямая иммунофлуоресцентная микроскопия (FANA — fluorescent antinuclear antibody test) на препарате Hep-2 клеток (клеточная линия, полученная из аденокарциномы гортани) — антинуклеарные антитела (при их наличии) связываются с антигенами клеток Hep-2, добавляют специальные светящиеся метки, присоединяющиеся к образованному комплексу и под микроскопом смотрят интенсивность и тип свечения. Лучший метод исследования антинуклеарных антител. Другое название — .

Результат исследования пишут в виде титра — максимального разведения крови, при котором видно свечение, также описывается тип флуоресценции (в случае положительного результата). Чем больше антител, тем выше титр. Низкие титры считаются негативными, а высокие обозначают повышенную концентрацию антиядерных антител.

Типы флуоресценции при оценке ANA:

• гомогенный (диффузный, однородный) — при системной красной волчанке, смешанных заболеваниях соединительной ткани (MCTD)
• зернистый (гранулярный) — при системной красной волчанке, синдроме Шегрена, склеродермии, ревматоидном артрите и MCTD — самый неспецифический
• ядрышковый (нуклеолярный) — при склеродермии и полимиозите
• центромерный — при склеродермии и CREST синдроме
• цитоплазматический — дерматомиозит, полимиозит, аутоиммунные заболевания печени, первичный билиарный цирроз

Пример положительного результата исследования антиядерных антител: «Положительный разведение/титр 1:320, гомогенная картина “.

Алгоритм действий врача после исследования антиядерных антител методом FANA

• отрицательный результат анализа на антиядерные антитела + симптомы — провести анализы: anti-Ro и anti-Jo1
• положительный результат анализа на антиядерные антитела + наличие/отсутствие симптомов — провести анализы на anti-DNA, anti-Sm, anti-Ro, антигистоновые и антицентромерные антитела, anti-Sci-70, anti-U1 RNP, anti-Jo1 — зависит от проявлений заболевания

Ферментный иммунный анализ

Ферментный иммунный анализ (ELISA ) — антитела, присутствующие в крови, связываются с соответствующим антигеном, что приводит к изменению цвета раствора.

• менее 1.0 U — отрицательный результат (норма)
• 1.1-2,9 U — слабо положительный (требует повторения)
• 3,0-5,9 U — положительный
• более 6,0 — резко положительный

Положительный результат анализа на антинуклеарные антитела — это не диагноз, а восклицательный знак о необходимости дополнительных исследований. Требует периодического, более тщательного обследования, для максимально раннего выявления возможного заболевания.

Отрицательный результат исследования на антинуклеарные антитела указывает на их отсутствие в крови, но не исключает диагноз аутоиммунного заболевания.

Норма

В норме в крови нет антиядерных антител.

Дополнительные исследования

• общий анализ мочи
• ревмопробы — , скорость оседания эритроцитов (СОЭ),
• циркулирующие иммунные комплексы
• С3 компонент комплемента
• С4 компонент комплемента

Что влияет на результат?

• лекарственные препараты — прокаинамид, фенитоин, пенициллин, гидралазин
• ОРЗ и простуда, любое острое или хроническое инфекционное заболевание

Причины появления ANA

1. Системные заболевания соединительной ткани

• — 95-100%, выявление антиядерных антител определяет диагноз
• (5-25%)
• (100%)
• (30-50%)
• ювенильный ревматоидный артрит (20-50%)
• (40-70%)
• (30-80%)
• (синдром Шарпа) 100%
• аутоиммунный гепатит (

Антинуклеарный фактор

Антинуклеарный фактор – лабораторный анализ, направленный на определение различных видов специфических иммуноглобулинов к структурам клеточного ядра. Показатель АНФ повышается при системных заболеваниях соединительной ткани. Тест выполняется с целью их диагностики, дифференциации, контроля лечения, выявления обострений. Назначается при клинических и лабораторных признаках системной красной волчанки, склеродермии, синдрома Шарпа, Шегрена, ревматоидного артрита, воспалительной миопатии. Исследованию методом РНИФ подвергается сыворотка венозной крови. Нормальный показатель – титр не выше 1:160. Сроки подготовки данных теста – 8 рабочих дней.

В основе ревматических болезней лежит аутоиммунная реакция против структур ядра клетки – комплексов из протеинов и нуклеиновых кислот. Антигены образуются при программированной гибели эпителиоцитов и лимфоцитов. Ультрафиолетовые лучи, инфекционные агенты, лекарства ускоряют разрушение клеток, замедляют удаление апоптозных телец, провоцируют развитие аутоиммунных процессов. Антитела к структурам ядра представлены множеством видов, при исследовании антинуклеарного фактора выделяется около восьми. Преимуществом теста является высокая специфичность – определяются антитела, которые невозможно очистить для ИФА . Однако часть иммунных комплексов экстрагируется в плазму при выполнении РНИФ, поэтому существует вероятность ложноотрицательного результата.

Показания

Исследование антинуклеарного фактора показано при системных патологиях соединительной ткани. Основанием для назначения теста служат:

• Симптомы ревматического заболевания . Характерные проявления – лихорадка, усталость, слабость, снижение массы тела, мышечные и суставные боли , кожные высыпания. Тест используется для выявления и дифференциации СКВ , склеродермии , синдрома Шегрена , Шарпа, ревматоидного артрита , воспалительных миопатий .
• Результаты лабораторных тестов . Подозрение на ревматическую патологию возникает при повышении СОЭ , уровня С-реактивного белка и ЦИК . Тест назначается для подтверждения диагноза.
• Диагноз ревматической болезни . Анализ производится несколько раз в год (частота определяется индивидуально) с целью контроля течения патологии, после курса применения иммуносупрессоров – для оценки эффективности терапии.

Подготовка к анализу

Биоматериал для определения антинуклеарного фактора – венозная кровь. Процедура забора осуществляется утром. Правила подготовки следующие:

1. Последний прием пищи должен быть совершен не позже чем за 4 часа. Пить воду разрешено в любое время.
2. Алкоголь, физические нагрузки, эмоциональные переживания следует исключить за день до процедуры.
3. Применение лекарств необходимо обсудить с врачом. Некоторые препараты провоцируют производство антител, развитие лекарственной волчанки. На фоне приема глюкокортикостероидов возможно получение ложноотрицательных данных.
4. Инструментальные диагностические процедуры, сеансы физиолечения должны производиться после сдачи крови.
5. Курение запрещено в последние 30 минут перед процедурой.

В лаборатории из крови выделяют сыворотку. Определение в ней антиядерных АТ выполняется методом РНИФ с применением клеточной культуры НЕр-2. Титр оценивается по наибольшему разведению биоматериала, при котором обнаруживается свечение ядерных структур, вид иммуноглобулинов – по характеру флуоресценции. Сроки выполнения анализа – 6-8 дней.

Нормальные значения

В норме результат исследования антинуклеарного фактора отрицательный. Титр не выше 1:160 для взрослых и детей. При интерпретации итогового значения учитываются замечания:

• Низкие титры ANA уменьшают вероятность аутоиммунной патологии, но не исключают ее. При СКВ в 5% случаев результат отрицательный, производится тест на антитела к SS-антигенам.
• Получение нормального результата после курса иммуносупрессивной терапии подтверждает ее успешность.
• Отрицательный результат на фоне симптомов аутоиммунной патологии требует проведения дополнительных анализов (NCA , ANA методом ИФА).

Повышение показателя

Антиядерные АТ не обладают цитотоксическими свойствами, но после их связывания с антигенами образуются иммунные комплексы, запускающие процессы воспаления в сосудистых стенках. Они проявляются поражениями кожи, почечных клубочков, оболочек суставов, плевры. Развивается симптоматика, характерная для системных патологий. По типу свечения с минимальным разведением сыворотки определяются возможные заболевания:

• Гомогенный . Диффузная флуоресценция указывает на наличие АТ к ds ДНК , гистонам. Определяется при СКВ и лекарственной волчанке .
• Периферический . Тип свечения обусловлен расположением хроматина, выявляется при наличии Ig к компонентам ДНК, специфичным для СКВ.
• Гранулярный . Антигенами являются комплексы нуклеопротеинов. Свечение неспецифично, обнаруживается при многих ревматических болезнях. Высокий титр и крупногранулярная флуоресценция наиболее характерны для синдрома Шарпа .
• Нуклеарный . Отражает наличие специфических Ig к структурам ядрышка. Выявляет склеродермию и синдром Шегрена. Редко отмечается при эндокринопатиях, кожных патологиях, пересадке органов.
• Центромерный. Антигенами являются центромеры хромосом. Свечение подтверждает лимитированную склеродермию.
• Цитоплазматический . Провоцируется наличием антител к тРНК-синтетазе (Jo-1), рибосомам, органеллам. Позволяет определить воспалительные миопатии, аутоиммунные поражения печени.
• Митохондриальный. Антигенами являются компоненты пируватдекарбоксилазного комплекса. Свечение характерно для первичного билиарного цирроза .
• Точечный . Связан с циркуляцией АТ к нуклеопротеинам, ассоциируется с аутоиммунными поражениями печени.

Снижение показателя

Снижение показателя имеет прогностическую ценность при мониторинге системных заболеваний соединительной ткани. Уровень ANA коррелирует с активностью патологических процессов, поэтому уменьшение их концентрации – признак ремиссии, успешности терапии.

Лечение отклонений от нормы

Тест на антинуклеарный фактор позволяет выявить наличие антител к ядерным антигенам и определить их вид. Благодаря этому анализ широко применяется для дифференциальной диагностики ревматических болезней. За интерпретацией результата и назначением лечения необходимо обратиться к врачу – ревматологу , иммунологу, дерматовенерологу .