Оснащение бактериологической лаборатории для проведения анализа. Устройство бактериологической лаборатории

ТЕМА ЗАНЯТИЯ : Бактериологическая лаборатория и правила работы в ней. Классификация микроорганизмов. Морфология бактерий. Методы определения вида микробов. Бактериоскопический метод. Техника микроскопирования с иммерсионной системой.

УЧЕБНАЯ ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ : Ознакомиться с устройством бактериологической лаборатории и правилами работы в ней. Ознакомиться с принципами классификации микроорганизмов. Изучить морфологические признаки бактерий и методы определения вида микробов. Освоить бактериоскопический метод исследования и технику микроскопирования с иммерсионной системой.

ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ :

1. Ознакомиться с устройством бактериологической лаборатории и правилами работы в ней.

2. Познакомиться с принципами классификации микроорганизмов.

3. Изучить морфологические признаки бактерий и методы определения вида микробов.

4. Освоить технику микроскопирования с иммерсионной системой.

Устройство бактериологической лаборатории

Бактериологическая лаборатория предназначена для исследования материалов, содержащих возбудителей бактериальных инфекций, для определения санитарно-микробиологических показателей, контроля состояния и напряженности специфического иммунитета и других микробиологических исследований. Бактериологическая лаборатория должна размещаться в изолированных от других лабораторий помещениях с необходимым оборудованием и мебелью. Лаборатория должна иметь отдельный вход, гардероб и душевую. В состав бактериологической лаборатории должны входить следующие помещения:

Комната приема и регистрации материалов;

Боксированные помещения для микробиологических исследований;

Автоклавная;

Моечная;

Виварий.

Комнаты для микробиологических исследований оборудуют термостатами, холодильниками, центрифугами, весами, водяными банями, электромагнитными мешалками. На столах размещают необходимую аппаратуру. Работу с инфицированным материалом проводят в боксе с предбоксником . У входа в бокс должен быть коврик, пропитанный дезраствором. В боксе разбирают поступившие пробы, готовят и фиксируют мазки-отпечатки, проводят посевы микроорганизмов на питательные среды. Поэтому в боксе располагают столы, на которых размещают необходимые для работы инструменты: емкости с дезрастворами для использованной посуды, штативы для пробирок, пробирки и чашки Петри с питательными средами, стерильные пипетки, ступки и т. д. В предбокснике в биксах необходимо иметь стерильные халаты, шапочки, маски, а также в предбокснике должна быть сменная обувь. В предбокснике можно размещать термостаты, холодильники, центрифуги и другое оборудование. В боксах и предбоксниках ежедневно проводят влажную уборку, дезинфекционную обработку и облучение с помощью бактерицидных ламп в течение 30-40 минут перед началом работы и после работы.

В автоклавной необходимо иметь два автоклава: один автоклав для чистых материалов (для стерилизации посуды, питательных сред, инструментов); другой автоклав для инфицированных материалов (для обезвреживания инфицированных инструментов и материалов).

Моечная предназначена для мытья посуды. Посуду, пипетки и инструменты, загрязненные инфицированным материалом, моют только после стерилизации. В ней размещают сушильные шкафы.

Виварием называется помещение, используемое для содержания лабораторных животных. В виварии необходимо иметь карантинное отделение, комнаты для экспериментальных и здоровых животных, помещения для мытья и дезинфекции клеток, инвентаря и спецодежды, кухню для приготовления корма, кладовую, фуражную, трупосжигательную печь. Все помещения вивария должны быть изолированы друг от друга.

В бактериологической лаборатории определяют вид инфекции, вызвавший то или иное заболевание организма. Для этого производят посевы крови, мочи, спинно-мозговой жидкости и других жидкостей организма на различные питательные среды. Иногда делают посевы с кожи, слизистой оболочки носа и глотки. Глазные врачи, поставив диагноз "конъюнктивит", тоже нередко направляют больного на бактериологическое исследование.

При подозрении на острый или хронический конъюнктивит исследование помогает уточнить диагноз и определить вид бактерий, вызвавших конъюнктивит. Исследование начинается с того, что с помощью специального приспособления берут содержимое конъюнктивального мешка и делают посев на специальный бульон, а затем - на питательную среду. Через 24-48 ч на питательной среде вырастают колонии бактерий. После специальной окраски их исследуют под микроскопом и определяют вид микроорганизмов, обитающих на конъюнктиве. Это чаще всего бактерии, реже - другие микроорганизмы (грибы, амебы).

Для решения вопроса о применении наиболее эффективного антибиотика определяют чувствительность болезнетворных бактерий к лекарственным веществам.

В заключение приведем несколько цифр и еще раз напомним о том, как вы можете защититься от инфекции.

Помните, что земля, вода и воздух населены микроорганизмами. При каждом движении, мигании, вздохе мы контактируем с ними. Наши слизистые оболочки не допускают их попадания в жизненно важные органы. Обратите внимание на интересные факты, собранные одним из любителей микробиологии.

В 1 г уличной пыли содержится около 2 млн микроорганизмов, они попадают в воздух с земли. Наибольшее число микробов находится в верхних 50 см почвы.

В водных бассейнах содержится от 5 до 10000 бактерий в 1 кв. см, а в городской реке - 23000 в 1 кв. см.

А вот данные о количестве микроорганизмов в 1 кв. м воздуха, окружающего нас: в воздухе в лесу или парке - от 100 до 1000 микробов в 1 кв. м, в морском воздухе в 100 км от берега - только 0,6, на высоте 2000 м - 3.

Совсем другая картина наблюдается на центральной улице среднего города - 3500 микробов в 1 кв. м, в новом доме - 4500, в старом - 36000, в больнице - 79000, в общежитии - 40000.

Эти цифры говорят сами за себя. Среди микроорганизмов - вирусы, бактерии, споры грибов и плесени. Кроме того, сама пыль по химическому составу, особенно на городских улицах, в квартирах, на различных производствах содержит вредные для организма химические и физические примеси. Наши слизистые оболочки и кожа не всегда могут справиться с такой нагрузкой без нашей помощи. Для того чтобы не болеть, нужно помнить о правилах профилактики.

Введение

Подобно общей части любой другой науки, общая бактериология рассматривает не конкретные вопросы (скажем, идентификацию отдельных видов бактерий), а проблемы в це­лом; ее методология охватывает основные процедуры, которые находят широкое применение в самых разнооб­разных лабораторных исследованиях. Данное учебно-методи­че­ское пособие не нацелено на идентификацию какой-либо группы микроорганизмов. Это задача следующих изданий – по частной и санитарной микробиологии. Однако методы, приведенные в нем, могут быть полезными в любой области, где приходится иметь дело с бактериями, и могут применяться для ре­шения практических задач, включающих выделение и типизацию бактерий.

Бактериология стала наукой только после того, как были разработаны уникальные методы, благодаря кото­рым она продолжает оказывать влияние и проникать в такие появившиеся позднее области науки, как вирусо­логия, иммунология и молекулярная биология. Разрабо­танная Р. Кохом техника использования чистых культур и впервые примененные Л. Пастером иммунологические ре­акции и химический анализ и сейчас не утратили своего значения.

Методология общей бактериологии отражена в данном издании с помощью такого построения, которое типично для стандартных учебных пособий по этой дис­циплине. Однако, в отличие от лабораторных практикумов по курсу микробиологии для вузов, она по некоторым разделам изложена более детально и носит справочный характер. Данная структура учитывает особенность подготовки и специализации врачей-бактериологов и ветсанэкспертов. Часто материал излагается произвольно, поэтому некоторые методы упо­минаются несколько раз, что обусловлено стремлением продемонстрировать их взаимосвязь.

Бактериологическая лаборатория

Бактериологические лаборатории как структурные единицы организуются в составе областных, районных, межрайонных ветеринарных лабораториях, а также в структуре зональных ветеринарных лабораторий. Они также организованы при центрах санитарно-эпидемио­логиче­ского надзора, в инфекционных больницах, больницах общего типа, некоторых специализированных ста­ционарах (например, в туберкулезных, ревматологических, кожно-венерологических), и в поликлиниках. Бактериологические лаборатории входят в состав специализированных научно-исследовательских учреждений. Бактериологические лаборатории постоянно используются для подтверждения или установления оценки пригодности мяса на пищевые цели по ВСЭ.

Объектами исследования в бактериологических лабо­раториях являются:

1. Выделения из организма: моча, кал, мокрота, гной, а также кровь, патологический и трупный материал.

2. Объекты внешней среды: вода, воздух, почва, смывы с предметов инвентаря, корма, технологическое сырьё получаемое от убоя сельскохозяйственных животных.

3. Продукты питания, образцы мяса и мясопродуктов, молока и молокопродуктов, которым необходимо дать оценку на пригодность для пищевых целей.

Помещение бактериологической лаборатории и оборудование рабочего места

Специфика микробиологических работ требует, чтобы по­мещение, отведенное под лабораторию, было изолировано от жилых комнат, пищевых блоков и других непрофильных производственных помещений.

В состав бактериологической лаборатории входят: лабо­раторные комнаты для бактериологических исследований и подсобные помещения; автоклавная или стерилизационная для обеззараживания отработанного материала и зараженной посуды; моечная, оборудованная для мытья посуды; бактериологическая кухня – для приготовления, разлива, стерилизации и хра­нения питательных сред; виварий для содержания подопыт­ных животных; материальная для хранения запасных реакти­вов, посуды, аппаратуры и хозяйственного инвентаря.

Перечисленные подсобные помещения как самостоятель­ные структурные единицы входят в состав крупных бактерио­логических лабораторий. В небольших лабораториях бактериологическую кухню и стерилизационную объединяют в одной комнате; специальное помещение для содержания подопытных живот­ных отсутствует.

Помещения микробиологических лабораторий по степени опасности для персонала разделяются на 2 зоны:

I. "Заразная" зона - помещение или группа помещений лаборатории, где осуществляются манипуляции с патогенными биологическими агентами и их хранение, персонал одет в соответствующий тип защитной одежды.

II. "Чистая" зона - помещения, где не проводят работу с биологическим материалом, персонал одет в личную одежду.

Под лабораторные комнаты, в которых производят все бактериологические исследования, отводят наиболее светлые, просторные помещения. Стены в этих комнатах на высоту 170 см от пола окрашивают в светлые тона масляной краской или покрывают кафелем. Пол застилают релином или линолеумом. Такого рода отдел­ка позволяет пользоваться при уборке помещения дезинфи­цирующими растворами.

В каждой комнате должна быть раковина с водопровод­ной подводкой и полкой для бутыли с дезинфицирующим раствором.

В одной из комнат оборудуют застекленный бокс - изолированное помещение с тамбуром (предбоксником) для выполнения работ в асептических условиях. В боксе ставят стол для посевов, табурет, над рабочим местом монтируют бактерицидные лампы. В предбокснике помещают шкаф для хранения стерильного материала. Окна и двери помещений "заразной" зоны должны быть герметичными. Имеющаяся вытяжная вентиляция из "заразной" зоны должна быть изолирована от других вентиляционных систем и оборудована фильтрами тонкой очистки воздуха.

Лабораторное помещение оборудуется столами лаборатор­ного типа, шкафами и полками для хранения необходимой при работе аппаратуры, посуды, красок и реактивов.

Очень большое значение для работы имеет правильная организация рабочего места врача-бактериолога и лаборанта. Лабораторные столы устанавливают около окон. При размещении их нужно стремиться к тому, чтобы свет падал спереди или сбоку от работающего, лучше с левой стороны, но ни в коем случае не сзади. Желательно, чтобы комнаты для проведения анализов, особенно для микроскопирования, имели ориентацию окон на север или северо-запад, так как для работы необходим ровный рассеянный свет. Освещенность поверхности столов для работы должна быть 500 лк. Для удобства дезинфекции поверхность лабораторных столов покрывают пластиком или обивают железом. За каждым сотрудником лаборатории закрепляют отдельное рабочее место размером 150´60 см.

Все рабочие места оборудуют предметами, необходимыми для повседневной бактериологической работы, перечень которых дан в таблице 1.

Таблица 1.

Необходимые предметы для бактериологической работы

Наименование предмета	Примерное количество
1. Набор красок и реактивов для окраски
2. Стекла предметные	25-50
3. Стекла покровные	25-50
4. Стекла с лунками	5-10
5. Штатив под пробирки
6. Петля бактериальная
7. Шпатели стеклянные
8. Шпатели металлические
9. Банка с ватой
10. Пипетки, градуированные на 1, 2, 5, 10 мл	По 25 каждого объема
11. Пипетки пастеровские	25-50
12. Пинцет, ножницы, скальпель	По 1
13. Емкости с дезинфицирующими растворами
14. Микроскоп с осветителем
15. Лупа 5 ´
16. Масленка с иммерсионным маслом
17. Фильтровальная бумага	3-5 листов
18. Банка с дезинфицирующим раствором для пипеток
19. Спиртовая или газовая горелка
20. Установка для окраски препаратов
21. Песочные часы на 1 или 2 минуты	По 1
22. Груша с резиновой трубкой
23. Карандаш по стеклу
24. Банка со спиртовыми ватками
25. Необходимая стерильная посуда	-

Дезинфекция

Дезинфекцией является уничтожение микроорганизмов в объектах внешней среды.

В микробиологических лабораториях дезинфекционные ме­роприятия используются очень широко. Оканчивая работу с заразным материалом, сотрудники бактериологических лабо­раторий производят профилактическую дезинфекцию рук и рабочего места.

Дезинфекции подвергают отработанный патологический материал (кал, моча, мокрота, различного вида жидкость, кровь) перед выбрасыванием его в канализацию.

Загрязненные патологическим материалом или культурой микробов градуированные и пастеровские пипетки, стеклян­ные шпатели и металлические инструменты тотчас после их употребления опускают в стеклянные банки с дезинфицирую­щим раствором, находящиеся на столе у каждого рабочего места.

Обязательной дезинфекции подлежат также использован­ные в работе предметные и покровные стекла, так как даже в фиксированном и окрашенном мазке иногда сохраняются жизнеспособные микроорганизмы, которые могут явиться источником внутрилабораторного заражения. Не обрабатывает­ся дезинфицирующими средствами только та посуда, в кото­рой выращивались микроорганизмы. Ее складывают в метал­лические бачки или биксы, пломбируют и сдают на автоклавирование.

Выбор дезинфицирующего вещества, концентрация его раствора, соотношение между количеством дезинфицирующего вещества и обеззараживаемого материала, а также про­должительность срока дезинфекции устанавливаются в зави­симости от конкретных условий, учитывающих в первую оче­редь устойчивость обеззараживаемых микробов, степень пред­полагаемого загрязнения, состав и консистенцию материала, в котором они находятся.

Дезинфекция рук после работы с заразным материалом и при попадании его на кожу. По окончании работы с заразным материалом руки профилактически дезинфицируют. Ватный шарик или марлевую салфетку смачивают 1% раствором хлорамина, протирают сначала левую, затем правую кисть руки в такой последовательности: тыл кисти, ладонная поверхность, межпальцевые пространст­ва, ногтевые ложа. Таким образом, сначала обрабатывают места наименее загрязненные, затем переходят к участкам кожи, загрязненным наиболее сильно. Протирают руки в течение 2 минут двумя тампонами последовательно. При загрязнении рук культурой патогенного микроба или патологиче­ским материалом в первую очередь дезинфицируют загряз­ненные участки кожи. С этой целью их покрывают на 3-5 минут ватой, увлажненной 1% раствором хлорамина, затем вату сбрасывают в бачок или ведро с отработанным ма­териалом, а руки обрабатывают вторым тампоном так же, как и при профилактической дезинфекции. После обработки хлорамином руки моют теплой водой с мылом. При работе с бактериями, образующими споры, обработка рук производится 1% активированным хлорамином. При попадании на руки заразного материала экспозицию дезинфицирующего ве­щества увеличивают до 5 минут.

Стерилизация

Стерилизация, в отличие от дезинфекции, предусматривает уничтожение в стерилизуемом объекте всех вегетативных и споровых, патогенных и непатогенных микроорганизмов. Стерилизацию производят различными способами: паром, сухим горячим воздухом, кипячением, фильтрацией и т. д. Выбор того или иного способа стерилизации определяется качеством и свойствами микрофлоры стерилизуемого объекта.

Подготовка и стерилизация лабораторного оборудования

Перед стерилизацией лабораторную посуду моют и сушат. Пробирки, флаконы, бутыли, матрацы и колбы закрывают ватно-марлевыми пробками. Поверх пробок на каждый сосуд (кроме пробирок) надевают бумажные колпачки.

Резиновые, корковые и стеклянные пробки стерилизуют в отдельном пакете, привязанном к горлышку посуды. Чашки Петри стерилизуют завернутыми в бумагу по 1-10 штук. Пастеровские пипетки по 3-15 шт. заворачивают в оберточную бумагу. В верхнюю часть каждой пипетки вкладывают кусочек ваты, предупреждающий попадание материала в окружающую среду. При завертывании пипеток нужно соблюдать большую осторожность, чтобы не обломать запаянные концы капилляров. Во время работы пипетки из пакета вынимают за верхний конец.

В верхнюю часть градуированных пипеток, как и в пастеровские пипетки, вставляют предохранительную вату и затем заворачивают в плотную бумагу, нарезанную предварительно полосками шириной 2-2,5 см и длиной 50-70 см. Полоску кладут на стол, левый конец ее загибают и завертывают им кончик пипетки, затем, вращая пипетку, навертывают на нее ленту бумаги. Для того чтобы бумага не разворачивалась, противоположный конец ее закручивают или приклеивают. На бумаге надписывают объем завернутой пипетки. При наличии пеналов градуированные пипетки стерили­зуют в них.

Лабораторную посуду стерилизуют:

а) сухим жаром при температуре 180°С и 160°С соответственно 1 ч и 150 минут.

б) в автоклаве при давлении 1,5 атм. в течение 60 минут, для уничтожения споровой микрофлоры – 90 минут при 2 атм.

Стерилизация шприцев. Шприцы стерилизуют в разобран­ном виде: отдельно цилиндр и поршень в 2% растворе гидрокарбоната натрия 30 минут. При работе со спороносной микро­флорой стерилизацию производят в автоклаве при 132±2°С (2 атм.) в течение 20 мин, при 126±2°С (1,5 атм.) - 30 мин. Простерилизованный шприц собирают после того, как он остынет, в цилиндр вставляют поршень, надевают иглу, пред­варительно вынув из нее мандрен. Иглу, цилиндр и поршень берут пинцетом, который стерилизуют вместе со шприцем.

Стерилизация металлических инструментов. Металличе­ские инструменты (ножницы, скальпели, пинцеты и пр.) сте­рилизуют в 2% растворе гидрокарбоната натрия, который предупреждает появление ржавчины и потерю остроты. Лез­вия скальпелей и ножниц перед погружением в раствор рекомен­дуется обертывать ватой.

Стерилизация бактериальных петель. Бактериальные пет­ли, сделанные из платиновой или нихромовой проволоки, сте­рилизуют в пламени спиртовой или газовой горелки. Такой способ стерилизации получил название прокаливания или фламбирования.

Петлю в горизонтальном положении вносят в нижнюю, наиболее холодную, часть пламени горелки, чтобы не про­изошло разбрызгивания сжигаемого патогенного материала. После того как он сгорит, петлю переводят в вертикальное положение, накаливают докрасна вначале нижнюю, затем верхнюю часть проволоки и прожигают петледержатель. Про­каливание в целом занимает 5-7 с.

Подготовка к стерилизации и стерилизация бумаги, марли и ваты. Вату, марлю, фильтровальную бумагу стерилизуют в сухожаровой печи при температуре 160°С в течение часа от момента показания термометром данной температуры или в автоклаве при давлении 1 атм. в течение 30 минут.

Перед стерилизацией бумагу и марлю нарезают кусочка­ми, а вату сворачивают в виде шариков или тампонов нуж­ной величины. После этого каждый вид материала в отдель­ности по одной или несколько штук заворачивают в плотную бумагу. При разрыве пакета стерилизованный материал следует стерилизовать повторно, так как стерильность его нарушается.

Стерилизация перчаток и других резиновых изделий. Из­делия из резины (перчатки, трубки и т. д.), загрязненные ве­гетативной формой микробов, стерилизуют кипячением в 2% растворе гидрокарбоната натрия или текучим паром в те­чение 30 минут; при загрязнении спороносной микрофло­рой-в автоклаве при давлении 1,5-2 атм. в течение 30 или 20 минут. Резиновые перчатки перед стерилизацией внутри и сна­ружи пересыпают тальком для предохранения их от склеива­ния. Между перчатками прокладывают марлю. Каждую пару перчаток завертывают отдельно в марлю и в таком виде по­мещают в биксы.

Стерилизация патогенных культур микробов. Пробирки и чашки, содержащие культуры микробов, не нужные для даль­нейшей работы, складывают в металлический бак, пломбиру­ют крышку и сдают на стерилизацию. Культуры патогенных микробов, вегетативные формы, убивают в автоклаве в течение 30 минут при давле­нии 1 атм. Сдача баков для стерилизации в автоклавную производит­ся специально выделенным лицом под расписку. Режим сте­рилизации регистрируется в специальном журнале. При уничтожении культур микробов I и II групп патогенности, а также материала, зараженного или подозрительного на заражен­ность возбудителями, отнесенными к этим группам, баки с от­работанным материалом переносят на металлических под­носах с высокими бортами в присутствии сопровождающего лица, допущенного к работе с заразным материалом.

Виды стерилизации

Стерилизация кипячением. Стерилизацию кипячением про­изводят в стерилизаторе. В стерилизатор наливают дистиллированную воду, так как водопроводная образует накипь. (Стеклянные предметы погружают в холодную, металлические предметы-в горячую воду с добавлением гидрокарбоната натрия). Стерилизуемые предметы кипятят на слабом огне 30-60 минут. Началом стерилизации считается момент закипания воды в стерилизаторе. По окончании кипячения инструменты берут стерильным пинцетом, который кипятят вместе с остальными предметами.

Стерилизация сухим жаром. Стерилизация сухим жаром производится в печи Пастера. Подготовленный к стерилиза­ции материал кладут на полки так, чтобы он не соприкасался со стенками. Шкаф закрывают и после этого включают обо­грев. Продолжительность стерилизации при температуре 150°С 2 ч, при 165°С – 1 ч, при 180°С – 40 мин, при 200°С – 10-15 мин (при 170°С бумага и вата желтеют, а при более высокой температуре обугливаются). Началом стерилизации считается тот момент, когда тем­пература в печи достигнет нужной высоты. По окончании срока стерилизации печь выключают, но дверцы шкафа не открывают до полного охлаждения, так как холодный воздух, поступающий внутрь шкафа, может вызвать образование тре­щин на горячей посуде.

Стерилизация паром под давлением. Стерилизацию паром под давлением производят в автоклаве. Автоклав состоит из двух котлов, вставленных один в другой, кожуха и крышки. Наружный котел называют водопаровой камерой, внутрен­ний - стерилизационной камерой. В водопаровом котле про­исходит образование пара. Во внутренний котел помещают стерилизуемый материал. В верхней части стерилизационного котла имеются небольшие отверстия, через которые прохо­дит пар из водопаровой камеры. Крышка автоклава гермети­чески привинчивается к кожуху. Кроме перечисленных основных частей, автоклав имеет ряд деталей, регулирующих его работу: манометр, водомер­ное стекло, предохранительный клапан, выпускной, воздушный и конденсационный краны. Манометр служит для опре­деления давления, создающегося в стерилизационной камере. Нор­мальное атмосферное давление (760 мм рт. ст.) принимается за нуль, поэтому в неработающем автоклаве стрелка манометра стоит на нуле. Между показания­ми манометра и температурой имеется определенная зависи­мость (табл. 2).

Таблица 2.

Соотношения показаний манометра и температуры кипения воды

Красная черта на шкале ма­нометра определяет максималь­ное рабочее давление, которое допускается в автоклаве. Пре­дохранительный клапан служит для предохранения от чрезмерно­го повышения давления. Его уста­навливают на заданное давление, то есть, давление, при котором нуж­но производить стерилизацию, при переходе стрелки манометра за черту клапан автоклава автоматически открывается и выпускает лишний пар, замедляя тем самым дальнейший подъем давления.

На боковой стенке автоклава имеется водомерное стекло, показывающее уровень воды в водопаровом котле. На трубке водомерного стекла нанесены две горизонтальные черты - нижняя и верхняя, обозначающие соответственно допускаемый нижний и верхний уровень воды в водопаровой ка­мере. Воздушный кран предназначен для удаления воздуха из стерилизационной и водопаровой камер в начале стерилиза­ции, так как воздух, являясь плохим проводником тепла, на­рушает режим стерилизации. На дне автоклава находится конденсационный кран для освобождения стерилизационной камеры от конденсата, образующегося в период нагревания стерилизуемого материала.

Правила работы с автоклавом. Перед началом работы осматривают автоклав и контрольно-измеритель­ную аппаратуру. В автоклавах с автоматическим регулированием пара на электровакуумном манометре водопаровой камеры стрелки устанавливают в соответствии с режимом стерилизации: ниж­нюю стрелку ставят на 0,1 атм. ниже, верхнюю-на 0,1 атм. выше рабочего давления, водопаровую камеру заполняют водой до верхней отметки мерного стекла. В период заполнения водой вентиль на трубе, по которой пар поступает в камеру, держат открытым для свободного выхода воздуха из котла. Стерилизационную камеру автоклава загружают стерилизуемым материалом. После этого крышку (или дверцу) автоклава закрывают, плотно закрепляя центральным затвором или болтами; чтобы избежать перекоса, болты завинчивают крест-накрест (по диаметру). Затем включают источник подогрева (электрический ток, пар), закрывая вентиль на тру­бе, соединяющей источник пара со стерилизационной камерой. С началом парообразования и создания давления в водопаровой камере производят продувку (удаление воздуха из стерилизационного котла). Способ удаления воздуха определяется конструкцией автоклава. Вначале воздух выходит отдельными порциями, затем появляется ровная непрерывная струя пара, указывающая, что из стерилизационной камеры воздух полностью вытеснен. После удаления воздуха кран закрывают, и в стерилизационной камере начинается постепенное повышение давления.

Началом стерилизации считается тот момент, когда стрелка манометра показывает заданное давление. После этого интенсивность подогрева уменьшают, чтобы давление в автоклаве в течение нужного времени оставалось на одном уровне. По окончании времени стерилизации подогревание прекращают. Закрывают вентиль в трубопроводе, подающем пар в стерилизационную камеру, и открывают вентиль на конденсационной (нисходящей) трубе для снижения давления пара в камере. После падения стрелки манометра до нуля медлен­но ослабляют прижимные приспособления и открывают крыш­ку автоклава.

Температура и продолжительность стерилизации опреде­ляются качеством стерилизуемого материала и свойствами тех микроорганизмов, которыми он заражен.

Контроль температуры в стерилизационной камере осуще­ствляется периодически с помощью бактериологических тестов. Биотесты изготовляются бактериологическими лабораториями ЦСЭН. В случае непрохождения данных тестов производят проверку технического состояния автоклава.

Стерилизация текучим паром. Стерилизация текучим паром производится в текучепаровом аппарате Коха или в автоклаве при незавинченной крышке и открытом выпускном кране. Аппарат Коха представляет собой металлический полый цилиндр с двойным дном. Пространство между верхней и нижней пластинками дна заполняют на 2/3 водой (для спуска оставшейся после стерилизации воды есть кран). Крышка аппарата имеет в центре отверстие для термометра и несколь­ко небольших отверстий для выхода пара. Стерилизуемый материал загружают в камеру аппарата неплотно, чтобы обеспечить возможность наибольшего кон­такта его с паром. Началом стерилизации считается время с момента закипания воды и поступления пара в стерилизационную камеру. В текучепаровом аппарате стерилизуют, главным образом, питательные среды, свойства которых из­меняются при температуре выше 100°С. Стерилизацию текучим паром следует проводить повтор­но, так как однократное прогревание при температуре 100°С не обеспечивает полного обеззараживания. Такой метод полу­чил название дробной стерилизации: обработку сте­рилизуемого материала текучим паром проводят по 30 минут ежедневно в течение 3 дней. В промежутках между стери­лизациями материал выдерживают при комнатной темпера­туре для прорастания спор в вегетативные формы, которые погибают при последующих прогреваниях.

Тиндализация. Тиндализация-дробная стерилизация с применением температуры ниже 100°С, предложенная Тиндалем. Прогревание стерилизуемoгo материала производят в водяной бане, снабженной терморегулятором, по часу при температуре 60-65°С в течение 5 дней или при 70- 80°C в течение 3 дней. В промежутках между прогреваниями обрабатывае­мый материал выдерживают при температуре 25°С для прорастания спор в вегетативные формы, которые погибают при последующих прогрева­ниях. Тиндализацией пользуются для обеспложивания питательных сред, содержащих белок.

Механическая стерилизация с помощью бактериальных ультрафильтров . Бактериальные фильтры применяют для освобождения жидкости от находящихся в ней бактерий, а также для отделения бактерий от вирусов, фагов и экзоток­синов. Вирусы бактериальными фильтрами не задерживаются, и поэтому ультрафильтрацию нельзя рассматривать как сте­рилизацию в принятом значении этого слова. Для изготовления ультрафильтров применяют мелкопористые материалы (каолин, асбест, нитроцеллюлоза и др.), спо­собные задерживать бактерии.

Асбестовые фильтры (фильтры Зейтца) представляют собой асбестовые пластинки толщиной 3-5 мм и диаметром 35 и 140 мм для фильтрации малых и больших объемов жидкости. В нашей стране асбестовые фильтры, изготовляют двух марок: «Ф» (фильтрующие), за­держивающие взвешенные частицы, но пропускающие бакте­рии, и «СФ» (стерилизующие), более плотные, задерживаю­щие бактерии. Перед употреблением асбестовые фильтры монтируют в фильтровальные аппараты и вместе с ними стерилизуют в ав­токлаве. Асбестовые фильтры используются однократно. Мембранные ультрафильтры изготавливаются из нитроцеллюлозы и представляют собой диски белого цвета диаметром 35 мм и толщиной 0,1 мм.

Бактериальные фильтры разли­чаются по величине пор и обозна­чаются порядковыми номерами (табл. 3).

Таблица 3.

Бактериальные фильтры

Непосредственно перед употреб­лением мембранные фильтры сте­рилизуют кипячением. Фильтры по­мещают в дистиллированную воду, подогретую до температуры 50- 60°С, чтобы предупредить их скру­чивание, кипятят на слабом огне в течение 30 минут, меняя 2-3 раза воду. Простерилизованные фильтры во избежание их повреждения вы­нимают из стерилизатора фламбированным и остуженным пинцетом с гладкими кончиками.

Для фильтрации жидкостей бактериальные фильтры монтируют в специальные фильтро­вальные приборы, в частности, в фильтр Зейтца.

Он состоит из 2-х частей: верхней, имеющей форму цилиндра или воронки, и нижней-опорной части аппарата, с так называемым фильтровальным столиком из металлической сетки или чистой керамической пластинки, на которую помещают мембранный или асбестовый фильтр. Опорная часть аппарата имеет форму воронки, суживающаяся часть которой находится в резиновой пробке горлышка колбы Бунзена. В рабочем состоянии верхнюю часть прибора фиксируют на нижней с помощью винтов. Перед началом фильтрации места соединения различных частей установки для создания герметичности заливают парафином. Отводную трубку колбы присоединяют толстостенной ре­зиновой трубкой к водоструйному, масляному или велосипедному нacocy. После этого в цилиндр или воронку аппарата наливают фильтруемую жидкость и включают насос, создающий вакуум в приемном сосуде. В результате образующейся разности давлений фильтруемая жидкость проходит через поры фильтра в приемник. Микроорганизмы остаются на поверхности фильтра.

Приготовление мазков

Для изучения микроорганизмов в окрашенном виде на предметном стекле делают мазок, высушивают, фиксируют его и после этого окрашивают.

Исследуемый материал распределя­ют тонким слоем по поверхности хорошо обез­жиренного предметного стекла.

Мазки готовят из культур микробов, патологического ма­териала (мокрота, гной, моча, кровь и др.) и из органов трупов.

Техника приготовления мазков определяется характером исследуемого материала.

Приготовление мазков из микробных культур с жидкой питательной средой и из жид­кого патологического материала (моча, ликвор и др.). Маленькую каплю исследуемой жидкости на­носят бактериальной петлей на предметное стекло и круго­выми движениями петли распределяют равномерным слоем в виде кружка диаметром в копеечную монету.

Приготовление мазков из крови. На пред­метное стекло, ближе к одному из его концов, наносят кап­лю крови. Второе - шлифованное - стекло, которое должно быть уже предметного, ставят на первое под углом 45° и подводят к капле крови до соприкосновения с ней. После того как кровь растечется по шлифованному краю, стеклом делают скользящее движение справа налево, равномерно рас­пределяя кровь тонким слоем по всей поверхности стекла. Толщина мазка зависит от величины угла между стеклами: чем острее угол, тем тоньше мазок. Правильно приготовленный мазок имеет светло-розовую окраску и оди­наковую толщину на всем протяжении.

Приготовление толстой капли. На середину предметного стекла пастеровской пипеткой наносят каплю крови или прикладывают стекло непосредственно к выступающей капле крови. Нанесенную на стекло кровь размазывают бактериальной петлей так, чтобы диаметр об­разующегося мазка соответствовал величине копеечной мо­неты. Стекло оставляют в горизонтальном положении до высыхания крови. Кровь в «толстой капле» распределяется неравномерно, образуя неровный край.

Приготовление мазка из вязкого мате­риала (мокрота, гной). Мокроту или гной, нанесенные на предметное стекло ближе к узкому краю, накрывают другим предметным стеклом. Стекла слегка придавливают друг другу.

После этого свободные концы стекол захватывают 1 и 2 пальцами обеих рук и разводят в противоположные стороны так, чтобы при движении оба стекла плотно прилегали друг к другу. Получаются мазки с равномерно распределенным материалом, занимающим большую площадь.

Приготовление мазка из культур с плотных питательных сред. На середину чистого, хорошо обезжиренного предметного стекла наносят каплю воды, в нее вносят бактериальную петлю с небольшим количеством исследуемой микробной культуры, так, чтобы капля жидко­сти стала слегка мутноватой. После этого излишек микроб­ного материала на петле сжигают в пламени и при­ступают к приготовлению мазка по вышеописанному способу.

Приготовление мазков из органов и тканей. Поверхность органа с целью обеззараживания прижигают накаленными браншами пинцета, делают по этому ме­сту надрез и из глубины остроконечными ножницами вырезают небольшой кусочек ткани, который помещают между двумя предметными стеклами. Далее поступают так же, как при приготовлении мазка из гноя и мокроты. Если ткань органа плотная, то из глубины разреза делают скальпелем соскоб. Полученный при соскабливании материал распределя­ют тонким слоем по поверхности стекла скальпелем или бактериальной петлей.

Для изучения взаимного расположения элементов ткани и находящихся в ней микроорганизмов делают мазки-отпе­чатки. Для этого вырезанный из середины органа небольшой кусочек ткани захватывают пинцетом и прикладывают по­следовательно несколько раз по­верхностью среза к предметному стеклу, получая, таким образом, ряд мазков-отпе­чатков.

Высушивание и фиксация мазков. Приготовленный на предметном стекле мазок высушивают на воздухе и после полного высыхания фиксируют. При фиксировании мазок закрепляется на поверхности предметного стекла, и поэтому при последующей окраске препарата микробные клетки не смываются. Кроме того, убитые микробные клетки окрашиваются лучше, чем живые.

Различают физический способ фиксации, в основу которого положено воздействие высокой температуры на микробную клетку, и химические способы, предусматривающие применение средств, вызывающих коагуляцию белков. Нельзя фиксировать над пламенем мазки, содержащие возбудителей I – II групп патогенности.

Физический способ фиксации. Предметное стекло с препаратом берут пинцетом или I и II пальцами правой руки за ребра мазком кверху и плавным движением проводят 2-3 раза над верхней частью пламени горелки. Весь процесс фиксации должен занимать не более 2 с. Надежность фиксации проверяют следующим простым приемом: свободную от мазка поверхность предметного стекла прикла­дывают к тыльной поверхности левой кисти. При правиль­ном фиксировании мазка стекло должно быть горячим, но не вызывать ощущения ожога.

Химический способ фиксации. Для фиксации мазков применяют также химические вещества и соединения, приведенные в таблице 4.

Таблица 4.

Вещества для химической фиксации

Предметное стекло с высушенным мазком погружают в склянку с фиксирующим веществом и затем высушивают на воздухе.

Окраска мазков

Техника окраски мазков. Для окраски мазков пользуются растворами красок или красящей бумагой, что предложено А.И. Синевым. Простота приготовления, удобство применения, а также возможность хранения красящей бумаги в течение неограниченно долгого времени явились основанием для широкого их использования при различных способах окраски.

Окраска мазков красящей бумагой. На высу­шенный и фиксированный препарат наносят несколько ка­пель воды, кладут окрашенные бумажки величиной 2´2 см. В течение всего времени окрашивания бумага должна оставаться влажной и плотно прилегать к поверхности стекла. При подсыхании бумагу дополнительно смачивают водой. Продолжительность окрашивания мазка определяется мето­дом окраски. По окончании окраски бумагу осторожно сни­мают пинцетом, а мазок промывают водопроводной водой и подсушивают на воздухе или фильтровальной бумагой.

Окраска мазков растворами красителей. На высушенный и фиксированный препарат пипеткой наносят краситель в таком количестве, чтобы он покрывал весь ма­зок. При окраске мазков концентрированными растворами красителей (карболовый фуксин Циля, карболовый генциановый или кристаллический фиолетовый) окрашивание произ­водят через фильтровальную бумагу, задерживающую части­цы красителя: на фиксированный мазок кладут полоску фильтровальной бумаги и на нее наливают раствор краси­теля.

Для микроскопического исследования приготовленные мазки, высу­шенные и зафиксированные, подвергают окраске. Окраска бывает простая и сложная. Простая окраска заключается в нанесении на мазок какой-либо одной краски на определенный промежуток времени. Чаще всего для про­стой окраски применяют спирто-водный (1:10) фуксин Пфейффера, леффлеровскую метиленовую синьку и сафранин. Эозин, как кислая краска, упо­требляется только для окраски цитоплазмы клеток и подкраски фона. Кислый фуксин совершенно непригоден для окраски бактерий.

Бактериологическая лаборатория и правила работы в ней. Классификация микроорганизмов. Морфология бактерий. Методы определения вида микробов. Бактериоскопический метод. Техника микроскопирования с иммерсионной системой

Конспект урока

Медицина и ветеринария

ЗАНЯТИЕ 1 ТЕМА ЗАНЯТИЯ: Бактериологическая лаборатория и правила работы в ней. Классификация микроорганизмов. Морфология бактерий. Методы определения вида микробов. Бактериоскопический метод. Техника микроскопирования с иммерсионной системой. УЧЕБНАЯ ЦЕЛЬ ЗАНЯТ...

ЗАНЯТИЕ 1

ТЕМА ЗАНЯТИЯ : Бактериологическая лаборатория и правила работы в ней. Классификация микроорганизмов. Морфология бактерий. Методы определения вида микробов. Бактериоскопический метод. Техника микроскопирования с иммерсионной системой.

УЧЕБНАЯ ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ : Ознакомиться с устройством бактериологической лаборатории и правилами работы в ней. Ознакомиться с принципами классификации микроорганизмов. Изучить морфологические признаки бактерий и методы определения вида микробов. Освоить бактериоскопический метод исследования и технику микроскопирования с иммерсионной системой.

ЗАДАЧИ ЗАНЯТИЯ :

1. Ознакомиться с устройством бактериологической лаборатории и правилами работы в ней.

2. Познакомиться с принципами классификации микроорганизмов.

3. Изучить морфологические признаки бактерий и методы определения вида микробов.

4. Освоить технику микроскопирования с иммерсионной системой.

Устройство бактериологической лаборатории

Бактериологическая лаборатория предназначена для исследования материалов, содержащих возбудителей бактериальных инфекций, для определения санитарно-микробиологических показателей, контроля состояния и напряженности специфического иммунитета и других микробиологических исследований. Бактериологическая лаборатория должна размещаться в изолированных от других лабораторий помещениях с необходимым оборудованием и мебелью. Лаборатория должна иметь отдельный вход, гардероб и душевую. В состав бактериологической лаборатории должны входить следующие помещения:

Комната приема и регистрации материалов;

Боксированные помещения для микробиологических исследований;

Автоклавная;

Моечная;

Виварий.

Комнаты для микробиологических исследований оборудуют термостатами, холодильниками, центрифугами, весами, водяными банями, электромагнитными мешалками. На столах размещают необходимую аппаратуру. Работу с инфицированным материалом проводят в боксе с предбоксником . У входа в бокс должен быть коврик, пропитанный дезраствором. В боксе разбирают поступившие пробы, готовят и фиксируют мазки-отпечатки, проводят посевы микроорганизмов на питательные среды. Поэтому в боксе располагают столы, на которых размещают необходимые для работы инструменты: емкости с дезрастворами для использованной посуды, штативы для пробирок, пробирки и чашки Петри с питательными средами, стерильные пипетки, ступки и т. д. В предбокснике в биксах необходимо иметь стерильные халаты, шапочки, маски, а также в предбокснике должна быть сменная обувь. В предбокснике можно размещать термостаты, холодильники, центрифуги и другое оборудование. В боксах и предбоксниках ежедневно проводят влажную уборку, дезинфекционную обработку и облучение с помощью бактерицидных ламп в течение 30-40 минут перед началом работы и после работы.

В автоклавной необходимо иметь два автоклава: один автоклав для чистых материалов (для стерилизации посуды, питательных сред, инструментов); другой автоклав для инфицированных материалов (для обезвреживания инфицированных инструментов и материалов).

Моечная предназначена для мытья посуды. Посуду, пипетки и инструменты, загрязненные инфицированным материалом, моют только после стерилизации. В ней размещают сушильные шкафы.

Виварием называется помещение, используемое для содержания лабораторных животных. В виварии необходимо иметь карантинное отделение, комнаты для экспериментальных и здоровых животных, помещения для мытья и дезинфекции клеток, инвентаря и спецодежды, кухню для приготовления корма, кладовую, фуражную, трупосжигательную печь. Все помещения вивария должны быть изолированы друг от друга.

Правила работы в бактериологической лаборатории

Сотрудники лаборатории обязаны соблюдать следующие правила:

1. Работать разрешается в специальной одежде – халате и шапочке. В боксе работают в стерильном халате, маске, шапочке, при необходимости надевают резиновые перчатки и очки. Обязательно меняют обувь.

2. Запрещается выходить за пределы лаборатории в халатах или надевать верхнюю одежду на халат.

3. В лаборатории запрещается курить и принимать пищу.

4. Весь материал, поступающий в лабораторию на анализ, должен рассматриваться как инфицированный. Поэтому при распаковке материала необходимо соблюдать осторожность. Емкости следует обтирать снаружи дезинфицирующим раствором и ставить их на подносы или в кюветы.

5. В случае попадания инфицированного материала на халат, руки, стол, обувь необходимо провести дезинфекцию и сообщить об этом заведующему лабораторией.

6. Зараженный материал обязательно уничтожают автоклавированием. Инструменты, а также поверхность рабочего стола после работы дезинфицируют.

7. Запрещается выносить из лаборатории оборудование, инвентарь, материалы без предварительной их дезинфекции.

8. Пипетки, предметные и покровные стекла и другую посуду, бывшую в употреблении, обеззараживают, погружая в дезраствор.

9. По окончании работы рабочее место приводят в порядок и тщательно дезинфицируют. Культуры микроорганизмов, необходимые для дальнейшей работы, убирают на хранение в холодильник.

В бактериологической лаборатории ведется следующая документация:

1. Инвентарная книга музейных штаммов культур.

2. Журнал учета движения материала в лаборатории.

3. Журнал учета стерилизации и уничтожения инфицированного материала.

4. Журнал учета зараженных подопытных животных.

5. Журнал исследований (экспертиз).

Классификация микроорганизмов

Классификация - это распределение организмов на основе учета их общих признаков на группы или таксоны . Классификация основывается на внешних признаках организмов (фенотипе) и генетических особенностях организмов (генотипе).

В настоящее время м ир микроорганизмов подразделяют на следующие формы:

1. Неклеточные формы:

Прионы;

Вироиды;

Вирусы.

2. Клеточные формы:

2.1. Прокариоты:

Домен Bacteria :

Бактерии с тонкой клеточной стенкой (грамотрицательные);

Бактерии с толстой клеточной стенкой (грамположительные);

Бактерии без клеточной стенки (микоплазмы).

Домен Archaea :

Архебактерии.

2.2. Эукариоты:

Простейшие;

Грибы.

В основу классификации живого мира положен тип строения клетки – эукариотический или прокариотический. Главными отличиями прокариотической (бактериальной) клетки от эукариотической являются: отсутствие следующих структур: оформленного ядра (то есть ядерной мембраны), внутриклеточных мембран, ядрышек, комплекса Гольджи, лизосом, митохондрий.

В классификации микробов используются следующие таксономические категории : царство, отдел, класс, порядок, семейство, род, вид. О сновной таксономической единицей является вид. Название микроорганизмам присваивается в соответствии с правилами Международного кодекса номенклатуры бактерий. Для обозначения видов бактерий принята двойная (бинарная) номенклатура , предложенная еще в XVIII веке Карлом Линнеем. Согласно номенклатуре, латинскими буквами сначала пишется название рода (родовое название), а затем - название вида (видовое название). Если микроорганизм идентифицирован только до рода, то вместо видового названия пишется слово sp . (species - вид). Родовую принадлежность микроба обозначает какой-либо морфологический признак или фамилия ученого, открывшего микроб, а видовую принадлежность обозначает либо вид колоний, либо среда обитания микроорганизма. Например, Escherichia coli указывает на то, что микроб открыл Т. Эшерих, а обитает микроб в кишечнике. Образование и применение научных названий микроорганизмов регламентируют “Международный кодекс номенклатуры бактерий”, “Международный кодекс ботанической номенклатуры” (грибы), “Международный кодекс зоологической номенклатуры” (простейшие) и решения Международного комитета по таксономии вирусов.

Бактерии обладают высокой изменчивостью. Для внутривидовой дифференциации бактерий, отличающихся по определенному признаку, используют понятие “вариант” (сокращенно – «вар»). Выделяют варианты, отличающиеся по антигенным признакам (серовары ), варианты, устойчивые к бактериофагам (фаговары ), а также варианты, различающиеся по биохимическим (хемовары ), биологическим или культуральным признакам (биовары ).

В микробиологии используются специализированные термины: чистая культура, смешанная культура, штамм, клон.

Культура - это совокупность микроорганизмов, выращенных на плотной или жидкой питательной среде в условиях лаборатории. Культуру микроорганизмов, состоящую из особей одного вида называют чистой культурой . Смешанной культурой называют смесь микроорганизмов разных видов, выросших в питательной среде при посеве исследуемого материала или при попадании в питательную среду, засеянную одним видом микроба, других видов микроорганизмов из внешней среды.

Штамм (нем. stammen – происходить) - это чистая культура определенного вида микроорганизма, выделенная из исследуемого материала, взятого в определенный момент из конкретного объекта.

Клон (греч. klon – отводок) - это потомство (культура) одной материнской клетки (вирусной частицы) определенного вида микроорганизмов.

Принципы классификации микроорганизмов

Минимальный перечень данных, необходимых для описания бактерий, включает в себя следующие признаки.

1. Морфологические и тинкториальные свойства - величина, форма, клеток, наличие капсулы, спор, жгутиков, способность окрашиваться красителями.

2. Тип дыхания – потребность в газообразном кислороде.

3. Биохимические свойства - способность ферментировать углеводы, расщеплять белки.

4. Антигенная структура – наличие антигенов.

5. Чувствительность к бактериофагам.

6. Химический состав - содержание и состав углеводов, липидов, белков.

7. Генетическое родство с другими бактериями.

В микробиологии созданы определители для идентификации микроорганизмов: “Определитель бактерий и актиномицетов” Н.А. Красильникова (1949 г.), “Определитель микробов” Р.А. Циона (1948 г.) и “Определитель бактерий” Д.Х. Берджи. Наиболее распространенной является классификация американского бактериолога Д.Х. Берджи. Определитель Берджи систематизирует все известные бактерии на 4 отдела:

Отдел I . Gracilicutes (лат. gracilis - изящный, тонкий, cutis – кожа) - виды с тонкой клеточной стенкой, окрашивающиеся грамотрицательно.

Отдел II . Firmicutes (лат. firmus - крепкий, cutis – кожа) - бактерии с толстой клеточной стенкой, окрашивающиеся грамположительно.

Отдел III . Tenericutes (лат. tener - нежный, cutis – кожа) - бактерии, не имеющие клеточной стенки – микоплазмы.

Отдел IV . Mendosicutes (лат. mendosus - неправильный, cutis – кожа) - архебактерии. В этот отдел включены метанобразующие, сероокисляющие, микоплазмоподобные, термоацидофильные и другие наиболее древние по происхождению бактерии.

Морфология бактерий

Бактерии невооруженным глазом не видны. Для их изучения используют световые и электронные микроскопы. Клетки бактерий измеряют в микрометрах (1 мкм равен 10 -3 мм), а элементы тонкого строения бактерий измеряют в нанометрах (1 нм равен 10 -3 мкм). Средние размеры бактерий составляют 0,5-3 мкм.

По форме клеток бактерии подразделяются на 3 основные группы:

Шаровидные формы или кокки;

Палочковидные формы;

Извитые формы.

Кокки имеют сферическую форму в виде правильного шара, эллипса, боба. В зависимости от взаимного расположения клеток после деления различают следующие виды кокков:

Микрококки делятся в разных плоскостях и располагаются одиночно, парами или беспорядочно;

Стафилококки делятся в различных плоскостях и располагаются гроздьями;

Диплококки делятся в одной плоскости, располагаются попарно;

Стрептококки делятся в одной плоскости, располагаются в виде цепочки;

Тетракокки делятся в двух взаимно перпендикулярных плоскостях, располагаются по четыре;

Сарцины делятся в трех взаимно перпендикулярных плоскостях и образуют правильные пакеты по 8-16 клеток.

Палочковидные бактерии имеют цилиндрическую форму с округлыми, заостренными или тупыми концами. Палочковидные бактерии подразделяются на 2 группы:

Бактерии – не образующие спор палочки;

Бациллы - палочки, образующие споры. Палочки, у которых диаметр споры превышает ширину вегетативной клетки, называют клостридиями .

По размерам палочковидные бактерии распределяются на группы:

Мелкие – до 1,5 мкм;

Средних размеров (1,5 – 3 мкм);

Крупные (более 3 мкм).

По форме концов выделяют:

Закругленные (кишечная палочка);

Обрубленные (возбудитель сибирской язвы);

Заостренные (каулобактеры);

Утолщенные (возбудитель дифтерии);

Расщепленные (бифидобактерии).

По взаимному расположению клеток :

Беспорядочно расположенные (сальмонеллы);

Попарно расположенные (диплобактерии);

Цепочками (стрептобактерии);

В виде хвороста (микобактерии туберкулеза);

В виде пачек сигарет (возбудитель лепры);

Под углом (возбудитель дифтерии).

Извитые бактерии объединяют:

Вибрионы - имеют цилиндрическую изогнутую форму, образуя 1/2-1/4 завитка спирали, по форме напоминают запятую;

Спириллы имеют форму спирально извитых палочек с 4-6 витками;

Спирохеты спирально извитые формы, у которых существуют 2 типа витков: первичные витки, образованные изгибами протоплазматического цилиндра, и вторичные витки, представляющие изгибы всего тела.

Методы определения вида микробов

Определение вида микроорганизмов проводится с использованием следующих методов исследования:

- бактериоскопический метод – изучение микроорганизмов путем их микроскопирования в живом или окрашенном состоянии;

- бактериологический метод – изучение характера роста микробов на плотных и в жидких питательных средах, определение ферментативной активности микробов, идентификация микробов (определение вида);

- серологический метод – изучение антигенного строения микробов;

- биологический метод (экспериментальный) – изучение патогенных свойств бактерий с использованием лабораторных животных;

- молекулярно-биологический метод – изучение генетических особенностей микробов.

С помощью этих методов изучают следующие свойства микробов:

- морфологические свойства – форма и размер бактерий;

Тинкториальные свойства – отношение бактерий к красителям;

Культуральные свойства – характер роста на питательных средах;

Биохимическая активность – ферментация углеводов, белков и других соединений;

Антигенная структура бактерий;

Патогенность ;

Генетические особенности микробов.

Бактериоскопический метод исследования

Клетки микроорганизмов можно изучать как в живом состоянии (метод раздавленной капли и метод висячей капли), так и в фиксированном и окрашенном состоянии.

Метод раздавленной капли . На поверхность обезжиренного предметного стекла наносят каплю исследуемого материала или суспензию бактерий и покрывают ее покровным стеклом. Капля не должна выходить за края покровного стекла. Микроскопируют препарат с объективом х40. Метод раздавленной капли удобен для исследования подвижности бактериальных клеток, а также для изучения крупных микроорганизмов - плесневых грибов, дрожжей.

Метод висячей капли . Препарат готовят на покровном стекле, в центр которого наносят каплю бактериальной суспензии. Затем специальное предметное стекло с лункой, края которой предварительно смазаны вазелином, прижимают к покровному стеклу так, чтобы капля находилась в центре лунки. Препарат переворачивают покровным стеклом вверх. В правильно приготовленном препарате капля должна свободно висеть над лункой, не касаясь ее дна или краев. Для микроскопии используют вначале сухой объектив х8, под увеличением которого находят края капли, а затем устанавливают объектив х40 и исследуют препарат.

Приготовление фиксированных препаратов . Для приготовления препарата на обезжиренное предметное стекло наносят каплю воды или изотонического раствора хлорида натрия, в которую бактериологической петлей вносят исследуемый материал и круговыми движениями петли распределяют его таким образом, чтобы получить тонкий и равномерный мазок диаметром 1-1,5 см. Если исследуют жидкий материал, то его наносят на предметное стекло непосредственно петлей и готовят мазок. Мазки высушивают на воздухе.

Для фиксации используют физические и химические методы. Для фиксации мазка физическим методом предметное стекло медленно проводят 3 раза через пламя горелки. Мазки крови, мазки-отпечатки органов и тканей фиксируют химическим методом путем погружения их на 5-20 минут в метиловый или этиловый спирт, смесь Никифорова и другие фиксирующие жидкости.

Для окрашивания микробов используют простые и сложные методы. При простом методе фиксированный мазок окрашивают каким-либо одним красителем, например, водным раствором фуксина (1-2 минуты) или метиленовым синим (3-5 минут), промывают водой, высушивают и микроскопируют. Сложные методы окрашивания включают последовательное использование нескольких красителей. Это позволяет выявить определенные структуры клеток и дифференцировать одни виды микроорганизмов от других.

Техника микроскопирования с иммерсионной системой

Для бактериоскопического исследования микроорганизмов наиболее часто применяют иммерсионные объективы. В отличие от сухих объективов, при работе с которыми между препаратом и линзой объектива находится воздух, при использовании иммерсионных объективов между линзой объектива и препаратом помещают жидкость, имеющую показатель преломления, близкий показателю преломления стекла. Роль такой жидкости выполняет иммерсионное масло, чаще всего - кедровое масло. Лучи света, проходя через однородную оптическую среду (стекло и масло), не меняют своего направления. Это позволяет существенно повысить четкость изображения. Иммерсионные объективы отличаются от сухих объективов по своему устройству (подвижная фронтальная линза) и по внешнему виду: на их оправе имеется черная круговая нарезка и выгравировано обозначение МИ (масляная иммерсия).

Для микроскопии с иммерсионным объективом требуется хорошее освещение объекта. Для этого используется дополнительная система линз, расположенная под предметным столиком – конденсор. При подготовке микроскопа к работе конденсор с помощью специального винта перемещают вверх до упора. На окрашенный мазок наносят каплю иммерсионного масла и помещают стекло на предметный столик. Под визуальным контролем сбоку опускают объектив до соприкосновения с каплей. После погружения объектива в каплю масла вращением макрометрического винта определяют контуры объекта, а затем с помощью микрометрического винта устанавливают четкое изображение объекта.

После окончания микроскопии иммерсионный объектив поднимают, препарат убирают, а фронтальную линзу объектива протирают от остатков масла мягкой салфеткой. Затем объектив переводят на малое увеличение или в нейтральное положение и опускают конденсор.

Контрольные вопросы по теме занятия:

1. Устройство бактериологической лаборатории.

2. Правила работы в бактериологической лаборатории.

3. Принципы классификации микроорганизмов.

4. Формы бактериальных клеток.

5. Методы определения вида микробов.

6. Техника микроскопирования с иммерсионной системой.

Литература для подготовки к занятию:

Основная литература:

1. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. Под ред. А.А. Воробьева. М., 2004.

Дополнительная литература:

1. Л.Б. Борисов. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М., 2002.

2. О.К. Поздеев. Медицинская микробиология. М., ГЭОТАР-МЕДИА, 2005.

3. Медицинская микробиология. Справочник. Под ред. В.И. Покровского и О.К. Поздеева. М., ГЭОТАР-МЕД, 1998.

А также другие работы, которые могут Вас заинтересовать
122.		Завдання для контрольної роботи по курсу Основи системного аналізу об’єктів та процесів комп’ютеризації	235.5 KB
	Контрольна робота складається з двох частин: теоретичної та практичної. I. В теоретичній частині потрібно дати розгорнуту відповідь на одне з наступних питань відповідно варіанту. II. В практичній частині необхідно розв’язати наступні задачі.
123.		ПРИЙНЯТТЯ РІШЕНЬ В УМОВАХ НЕВИЗНАЧЕНОСТІ	195.5 KB
	Якщо існування функцій розподілу ймовірностей, які характеризують степінь неповноти або неточності інформації про вихідні дані задачі прийняття рішень не гарантується, то таку ситуацію класифікують як прийняття рішень в умовах невизначеності.
124.		АНАЛІЗ КОНФЛІКТНИХ СИТУАЦІЙ. ЕЛЕМЕНТИ ТЕОРІЇ ІГОР	295.5 KB
	В теорії ігор супротивники – гравці. Кожен з гравців має деяку множину (скінченну або нескінченну) можливих дій (стратегій). Результати в грі задаються функціями, що залежать від стратегій кожного з гравців. Гра з двома гравцями, у якій виграш одного з гравців дорівнює програшу другого, називається грою з нульовою сумою. У такій грі достатньо задати результати у вигляді платежів одного з гравців.
125.		Основы гражданской обороны. Структура и место в обществе	186 KB
	Концепция современной войны значительно уменьшает вероятность ковровых бомбежек с массовым поражением населения и огромными разрушениями жилого фонда, что требовало эвакуации граждан в пригородную зону.
126.		Основные понятия системного анализа и его критерии	540.5 KB
	Системный анализ - наука, занимающаяся проблемой принятия решения в условиях анализа большого количества информации различной природы. Из определения следует, что целью применения системного анализа к конкретной проблеме является повышение степени обоснованности принимаемого решения, расширение множества вариантов, среди которых производится выбор, с одновременным указанием способов отбрасывания заведомо уступающим другим.
127.		Системи керування Базами Даних	61 KB
	Microsoft SQL Server - комерційна система керування базами даних, що розповсюджується корпорацією Microsoft. Мова, що використовується для запитів - Transact-SQL, створена спільно Microsoft та Sybase. Transact-SQL є реалізацією стандарту ANSI/ISO щодо структурованої мови запитів (SQL) із розширеннями. Використовується як для невеликих і середніх за розміром баз даних, так і для великих баз даних масштабу підприємства. Багато років вдало конкурує з іншими системами керування базами даних.
128.		Свой сайт самостоятельно SQL. 10 минут на урок.	51.75 MB
	Данная книга поможет вам в кратчайшие сроки освоить SQL - самый популярный язык баз данных. Начиная с простых запросов на выборку данных, автор урок за уроком рассматривает все более сложные темы, такие как использование операций объединения, подзапросы, хранимые процедуры, индексы, триггеры и ограничения. На изучение материала каждого урока вам потребуется не более 10 минут. Благодаря этой книге вы быстро научитесь самостоятельно составлять запросы к базам данных на языке SQL без чьей-либо помощи.
129.		Организация труда на предприятии по изготовлению алюминия	94.93 KB
	Расчет производственной программы электролизного цеха. Расчет эффективного фонда времени одного рабочего на год. Расчет амортизационных отчислений на содержание зданий и сооружений. Составление плановой калькуляции себестоимости одной тонны алюминия.
130.		Обучение математическому моделированию как основному методу решения текстовых задач в курсе алгебры основной школы	517 KB
	Психолого-педагогические основы обучения решению текстовых задач в курсе алгебры основной школы. Математическое моделирование – один из основных методов решения текстовых задач в основной школе. Методика обучения решению текстовых задач на основе моделирования задачной ситуации.

Оснащение бактериологической лаборатории должно отвечать требованиям эффективности и безопасности. Если речь идет о специализированных учреждениях, то они укомплектоваются устройствами, которые соответствуют задачам учреждений, а также выполняют контролирующие функции. В них применяется оборудование, которое позволяет сотрудникам проводить исследования в научных интересах или с медицинскими целями: уточнить, поставить диагноз, провести профилактику.

3.1. Принцип идентификации микроорганизмов в MALDI BioTyper.

Быстрое действие установки обеспечивает высокую скорость работы. Для выполнения одной операции требуется несколько минут. Линейка аппаратов MALDI BioTyper представлена разными технологическими приборами для выполнения специальных задач.

3.2. Устройство бактериологической лаборатории на базе времяпролетного масс-спектрометра.

MALDI BioTyper расширяет возможности оснащения бактериологической лаборатории, в которой оборудованы рабочие зоны:

«грязная» - помещения приема и регистрации анализов, посевные комнаты;

«рабочая» - микробиологические анализаторы;

«чистая» - автоклавная и стерилизационные, средоварочные, боксы;

зона «санитарной микробиологии».

Научно-производственная фирма ЛИТЕХ предоставляет два варианта комплектации:

«Стандарт» и «Стандарт+». Модели и количество приборов изменяются в зависимости от пожеланий заказчика.

Базовым прибором в комплекте «Стандарт» является масс-спектометр Microflex, предназначенный для анализа малых молекул и полимеров. Быстрый и точный прибор идеально подходит не только для микробиологических исследований, но и таких областей, как клиническая протеомика и функциональная геномика.

В комплектацию «Стандарт» входит следующее оборудование для бактериологической лаборатории:

CO2 инкубатор на 170 литров, с диапазоном рабочих температур от +5°С до +50°С;

Анализатор культур крови;

Расходные материалы для анализатора гематологических культур: контейнеры, стойки, газогенерирующие пакеты;

Бидистилятор без накопителя, производительностью 8 литров в час;

Электронные весы;

Настольные центрифуги двух моделей: 5702R Eppendorf, Z 206 А Hermle Labortechnik;

Инкубатор общего назначения;

Автоклавы с горизонтальной, вертикальной загрузкой;

Электрическая настольная плитка;

Автоматическая средоварка;

Водяная баня со встроенной мешалкой;

Микропроцессорный pH-метр с автоматической калибровкой и автотермокомпенсацией;

Микроскопы.

Для оснащения помещений высокого риска заражения предложен рециркулятор. На выбор предоставляется одна из двух моделей: настенный «Дезар-5» или напольный «Дезар-7». Оба обладают высокой эффективностью в отношении

различных микроорганизмов, например, санитарно-показательных, золотистого стафилококка.

Помимо перечисленного оборудования для бактериологической лаборатории в комплект входят ламинарный, вытяжной, сухожаровой шкафы, бокс на разливы

сред, холодильная витрина, стол-мойка, дозаторы разного назначения.

Базовым для комплекта «Стандарт+» является аналогичное устройство: масс-спектрометр Microflex. Многие приборы также совпадает по назначению, но различаются по торговым маркам.

Из отличий отметим аквадистиллятор в полной комплектации, который обеспечивает высокий уровень очистки воды (тип II), и дополнительный автоматический проходной автоклав с распашными дверями. Полный список устройств для бактериологической лаборатории опубликован на странице «Врианты комплектации».

4. Дополнительное оснащение бактериологической лаборатории.

Оборудование BIOMIC V3 может быть использовано вместе с любым из комплектов или для дополнительного оснащения. Используется для идентификации бактерий и определения чувствительности к антибиотикам.

Микробиологический анализатор автоматически считывает, интерпритирует и выдает экспертное заключение. Для этого применяются диско-диффузный метод, Е-тесты, панели (ID-тесты) и хромогенные среды; так же выполняется подсчет колоний.

Оборудование обеспечивает быстрое определение результатов с идентификационных панелей разных производителей: API®, RapID, CrystalTM, а также 96-луночных плашек для микротипирования. Предоставляется возможность сохранения цветных изображений панелей и плашек. Исследования выполняются поэтапно; результаты передаются в систему ЛИС.

Подсчет колоний возможен в отдельном секторе. Удобство работы обеспечивают следующие особенности:

Разделение колоний по цветам и размерам;

Возможность различить соприкасающиеся колонии, а также колонии и дебрис;

Сохранение и печать изображений;

Определение результатов с любых хромогенных агаров, мембранных фильтров, спиральных чашек.

Анализатор отвечает строгим требованиям качества. Для этого предназначена встроенная программа контроля. Она позволяет оформлять сводные отчеты с использованием шаблонов из ПО системы, сохранять полученную информацию.

Устройство бактериологической лаборатории непосредственно влияет на успех проводимых исследований. Современное оснащение позволяет поддерживать высокий уровень точности и безопасности анализов. BioTyper является уникальной системой по предоставляемым возможностям.

5. Правила работы и поведения в лаборатории.

Особенностью бактериологических работ является постоянное соприкосновение сотрудников лаборатории с заразным материалом, культурами патогенных микробов, заражёнными животными, кровью

и выделениями больного. Поэтому все сотрудники бактериологической лаборатории обязаны соблюдать следующие правила работы, которые обеспечивают стерильность в работе и предупреждают возможность возникновения внутрилабораторных заражений:

В помещения бактериологической лаборатории нельзя входить без специальной одежды - халата и белой шапочки или косынки.

Нельзя вносить в лабораторию посторонние вещи.

Запрещается выходить за пределы лаборатории в халатах или надевать верхнее платье на халат.

В помещении бактериологической лаборатории категорически запрещается курить, принимать пищу, хранить продукты питания.

Весь материал, поступающий в лабораторию, должен рассматриваться как инфицированный.

При распаковке присланного заразного материала необходимо соблюдать осторожность: банки, содержащие материал для исследования, при получении обтирают снаружи дезинфицирующим раствором и ставят не прямо на стол, а на подносы или в кюветы.

Переливание жидкостей, содержащих патогенные микробы, производят над сосудом, наполненным дезинфицирующим раствором.

О случаях аварии с посудой, содержащей заразный материал, или проливания жидкого заразного материала надо немедленно сообщать заведующему лабораторией или его заместителю. Мероприятия по обеззараживанию загрязнённых патогенным материалом платья частей тела, предметов рабочего места и поверхностей осуществляют немедленно.

При исследовании заразного материала и работе с патогенными культурами микробов необходимо строго соблюдать общепринятые в бактериологической практике технические приёмы, исключающие возможность соприкосновения рук с заразным материалом.

Заражённый материал и ненужные культуры подлежат

Обязательному уничтожению, по возможности в тот же день. Инструменты, использованные в работе с заразным материалом, тотчас посте их употребления дезинфицируют, как и поверхность рабочего места.

При выполнении бактериологических работ нужно строго следить за чистотой рук: по окончании работы с заразным материалом их дезинфицируют. Рабочее место в конце дня приводят в порядок и тщательно дезинфицируют, а заразный материал и культуры микробов, необходимые для дальнейшей работы, ставят на хранение в запирающийся рефрижератор или сейф.

Работники бактериологической лаборатории подлежат обязательной вакцинации против тех инфекционных болезней, возбудители которых могут встретиться в исследуемых объектах.

6. Уборка лабораторного помещения.

Микробиологическую лабораторию необходимо содержать в чистоте. Следует регулярно проводить гигиеническую уборку помещений лаборатории. Обеспечить полную стерильность лаборатории очень трудно и это не всегда необходимо, но значительно снизить количество микроорганизмов в воздухе и на различных поверхностях в лабораторных помещениях возможно. Это достигается путём применения на практике методов дезинфекции, то есть уничтожения возбудителей инфекционных болезней на объектах внешней среды.

Пол, стены и мебель в микробиологической лаборатории обрабатывают пылесосом и протирают различными дезинфицирующими растворами. Обработка пылесосом обеспечивает освобождение предметов от пыли и удаление с них значительного количества микроорганизмов. Установлено, что при 4-кратном проведении щёткой пылесоса по поверхности предмета с него удаляется примерно 47 % микроорганизмов, а при 12-кратном - до 97 %. В качестве дезинфицирующих растворов чаще всего применяют 2-3%-ным раствором соды (бикарбонат натрия) или лизола (препарат фенола с добавлением зелёного мыла), 0,5-3%-ным водным раствором хлорамина и некоторыми другими дезинфектантами.

Воздух в лаборатории наиболее просто дезинфицировать проветриванием. Продолжительная вентиляция помещения через форточку (не менее 30-60 минут) приводит к резкому снижению количества микроорганизмов в воздухе, особенно при значительной разнице в температуре между наружным воздухом и воздухом помещения. Более эффективный и наиболее часто применяемый способ дезинфекции воздуха - облучение УФ-лучами с длиной волны от 200 до 400 нм. Эти лучи обладают высокой антимикробной активностью и могут вызывать гибель не только вегетативных клеток, но и спор микроорганизмов.