Провокации при гонорее - методы и методики обследования больных с кожными и венерическими заболеваниями. Жюль Борде и Николай Чистович

; 2) выражение реакции в присутствии гемолитической системы ().

Для постановки РСК изучаемые объекты (антитела и антигены) помещают в условия, обеспечивающие их взаимодействие в присутствии комплемента; затем к анализируемой иммунной системе добавляют «индикатор» - гемолитическую систему. Если комплемент фиксировался иммунной системой, гемолиза не происходит (положительная РСК; рис., а); если же иммунная система не фиксировала комплемент и ее компоненты не соответствуют друг другу, гемолиз происходит (отрицательная РСК; рис., б). Ингредиенты реакции: 1) испытуемая , инактивированная прогревом в течение 30 мин. при t° 56°; 2) антиген (взвеси бактерий, экстракты органов и тканей, ); 3) комплемент (свежая сыворотка морской свинки); 4) гемолитическая система (сенсибилизированные барана, инкубированные с гемолитической сывороткой в течение 30 мин. при t° 37°). Для разведения ингредиентов используют изотонический раствор хлорида натрия. Первый этап РСК продолжается 60 мин. при t° 37° или 18-20 час. при t° 4-6° (более чувствительная РСК), второй этап - 60 мин. при t° 37°.

Схема реакции связывания комплемента: а - положительная; б - отрицательная. 1 - комплемент; 2 - сыворотка больного; 3 - сыворотка здорового; 4 - антиген; 5 - гемолитическая сыворотка; 6 - эритроциты барана.

Борде - Жангу реакция - иммунологическая реакция, основанная на свойстве комплекса антиген - антитело фиксировать свободный комплемент. РСК протекает в 2 фазы: 1) адсорбция антител на антигенах, 2) выражение реакции (бактериолиз или гемолиз), для которого необходимо присутствие комплемента. Зависимость бактериолитических реакций от присутствия комплемента позволяет выявить взаимодействие антител с антигенами в реакции Борде - Жангу. Показателем соответствия антител в этой реакции служит фиксирование комплемента соответствующими иммунными системами, выявляемое добавлением к реакционной смеси «индикаторной» гемолитической системы.

Реакция Борде - Жангу осуществляется в два этапа: сначала изучаемые антигены и антитела помещают в условия, обеспечивающие их взаимодействие в присутствии комплемента, а после завершения адсорбции к анализируемой иммунной системе добавляется гемолитическая система (гемолизин + + эритроциты). При соответствии антигенов и антител происходит их взаимодействие и присутствующий в реагирующей смеси комплемент фиксируется иммунной системой. В этом случае при добавлении индикаторной системы гемолиза не происходит ввиду отсутствия комплемента (реакция положительная). Если анализируемые антитела не адсорбируются на антигенах, то комплемент в реагирующей смеси остается свободным и при добавлении гемолитической системы осуществляется гемолиз (реакция отрицательная).

Принцип разработанного Борде и Жангу метода серологического анализа лег в основу многочисленных модификаций реакции, используемой в диагностической практике и научно-исследовательской работе.

Обычная РСК, при которой регистрируется 100% лизис эритроцитов, предусматривает необходимость предварительного титрования комплемента; последний добавляется к иммунной системе в дозе, не превышающей необходимой для гемолитической реакции. Схемы постановки реакции определяются ее целью. В опыте могут испытываться различные дозы антигена при постоянном содержании сыворотки и комплемента, различные разведения сыворотки при постоянных дозах антигена и комплемента и т. д. Ингредиентами реакции являются: 1) испытуемая сыворотка, прогретая в течение 30 мин. при 56° с целью инактивации присутствующего в ней комплемента; 2) антигены (в качестве которых используют суспензии бактерий, экстрагированные из них белки, полисахариды и др.), экстракты из клеток растений и животных, вирусы и т. д., 3) комплемент - свежая сыворотка морских свинок, 4) гемолитическая система (сенсибилизированные бараньи эритроциты) - 5% суспензия эритроцитов, контактировавших с гемолитической сывороткой в течение 30 мин. при t° 37°.

Для разведения ингредиентов используют физиологический раствор NaCl. Антикомплементарность отдельных ингредиентов испытывается в контрольных пробах. Первый этап реакции (адсорбция антител) осуществляется при t° 37° в течение 60 мин. либо при 4-6° в течение 18- 20 час. (РСК на холоде). В последнем случае происходит более полная фиксация комплемента, что увеличивает чувствительность метода. На втором этапе реакционные смеси выдерживают при t° 37°. Результат регистрируют в момент 100% гемолиза в контрольных пробах.

В диагностической практике используют активные, а также «непрямые» методы реакции связывания комплемента, являющиеся модификациями реакции Борде - Жангу. В первых из них показателем реакции служит изменение содержания комплемента в испытуемой сыворотке. Вторые основаны на том, что при некоторых заболеваниях сыворотки не содержат комплементсвязывающих антител, но способны предотвращать реакции с сыворотками, обладающими комплементсвязывающей активностью.

Наибольшая чувствительность и точность присуща количественной РСК, в которой регистрируют гемолиз в зоне частичного лизиса. Чувствительность данной модификации реакции Борде - Жангу обусловлена тем, что в средней зоне лизиса (20-80%) отношение количества комплемента к количеству лизируемых эритроцитов имеет линейный характер. В основе этой реакции лежит специальный метод титрования комплемента, количество которого выражается в 50% единицах (С H50) и подсчитывается на основе уравнения Крога, представляющего ход гемолиза в зоне частичного лизиса. Согласно уравнению, где x - количество взятого комплемента, y - степень гемолиза, выраженная как часть единицы, k - доза комплемента, дающая 50% лизис, а показатель 1/n выражает степень наклона гемолитической кривой.

Степень гемолиза устанавливается при помощи спектрофотометра или фотоэлектроколориметра.

Количественная РСК в свою очередь имеет ряд модификаций. В частности, микрометод обеспечивает большую точность определений при малом расходе ингредиентов.

БОРДɖЖАНГУ́ РЕАКЦИЯ , то же, что реакция связывания комплемента.

• - Борде́—Жангу́ реакция, то же, что реакция связывания комплемента...
• - то же, что реакция связывания комплемента...

  Ветеринарный энциклопедический словарь

• - см. Борде-Жангу среда...

  Большой медицинский словарь

• - Schiff reaction) - тест, позволяющий выявить наличие в тканях гликопротеинов, полисахаридов, некоторых мукополисахаридов, гликолипидов и ряда жирных кислот...

  Медицинские термины

• - БОРДЕ, ЖЮЛЬ ЖАН БАТИСТ ВЕНСАН, бельгийский бактериолог и иммунолог, удостоенный в 1919 Нобелевской премии по физиологии и медицине за работы в области иммунологии. Родился 13 июня 1870 в Суаньи...

  Энциклопедия Кольера

• - французская актриса...
• - професс. франц. слов. в высш. уч. зав.; р. 1772, † 27 авг. 1851...

  Большая биографическая энциклопедия

• - см. Палочка коклюша...

  Большой медицинский словарь

• - (J. J. Bordet, 1870-1961, бельг. бактериолог...

  Большой медицинский словарь

• - теория, согласно которой в основе образования комплекса антиген - антитело лежат явления адсорбции...

  Большой медицинский словарь

• - см. Палочка коклюша...

  Большой медицинский словарь

• - см. Реакция связывания комплемента...

  Большой медицинский словарь

• - плотная питательная среда для культивирования гемоглобинофильных бактерий, представляющая собой картофельно-глицериновый кровяной...

  Большой медицинский словарь

• - Жюль, бельгийский иммунолог и бактериолог. Окончил в 1892 Брюссельский университет. В 1894-1901 работал в Институте Пастера в Париже. В 1901 основал и возглавил Институт Пастера в Брюсселе...
• - Бордё Жюль, бельгийский иммунолог и бактериолог. Окончил в 1892 Брюссельский университет. В 1894-1901 работал в Институте Пастера в Париже. В 1901 основал и возглавил Институт Пастера в Брюсселе...

  Большая Советская энциклопедия

• - бельгийский иммунолог и бактериолог. Исследовал механизм серологических реакций; открыл реакцию связывания комплемента. Установил возбудителя и разработал метод иммунизации против коклюша. Нобелевская премия...

  Большой энциклопедический словарь

"Борде Жангу реакция" в книгах Жюль Борде и Николай Чистович Из книги Сфинксы XX века автора Петров Рэм Викторович Жюль Борде и Николай Чистович Из книги Сфинксы XX века автора Петров Рэм Викторович

Жюль Борде и Николай Чистович Трактовать иммунитет только как способ защиты организма от возбудителей инфекционных болезней в наши дни непростительная инерция мышления. И не безобидная. Если так думает неспециалист - это всего лишь заблуждение. Если же так пишет автор

Реакция Из книги Личная жизнь Александра I автора Соротокина Нина Матвеевна

Реакция Священный союз не мог обеспечить мира и спокойствия «в поврежденной уже в рассудке Европе» (так характеризует Европу Вигель). Франция бунтовала, в Испании король Фердинанд распустил масонские ложи и восстановил в правах инквизицию, в Италии обывателей пугали

РЕАКЦИЯ Из книги Керенский автора Федюк Владимир Павлович

РЕАКЦИЯ С утра 6 июля на Варшавский и Николаевский вокзалы стали прибывать эшелоны с войсками, вызванными с фронта для подавления беспорядков. В составе сводного отряда были 14-я кавалерийская дивизия, 117-й Изборский полк, 14-й донской казачий и еще несколько полков и

5. РЕАКЦИЯ Из книги Александр I. Сфинкс на троне автора Мельгунов Сергей Петрович

5. РЕАКЦИЯ Уже в 1819 г. перед нами раскрывается картина полной реакционной вакханалии, являвшейся прямым отзвуком той общеевропейской реакции, которая охватила и правительства и господствующие классы, вышедшие победителями в борьбе с революционными началами.В Европе

РЕАКЦИЯ Из книги Я сам автора Маяковский Владимир Владимирович

РЕАКЦИЯ По-моему, началось со следующего: при панике (может, разгоне) в демонстрацию памяти Баумана мне (упавшему) попало большущим барабанищем по голове. Я испугался, думал - сам

Реакция Из книги История диджеев автора Брюстер Билл

Реакция За всем этим безумием стояла своя система. Клубная сфера - это свободный рынок, регулируемый спросом и предложением. Диджеям платят лишь в том случае, если они выгодны промоутеру с точки зрения привлечения аудитории. Точно так же никчемной актрисе могут

Реакция ОКХ Из книги Заговор против Гитлера. Деятельность Сопротивления в Германии. 1939-1944 автора Дойч Гарольд С

Реакция ОКХ Если действия Варлимонта и Рейхенау отразили настроения той части командного состава, которая не имела каких–либо контактов с оппозицией и тем более не могла быть отнесена к ней, то нетрудно представить, какую реакцию вызвали планы Гитлера осуществить

9.2. Реакция США Из книги Управляя рисками. Клиринг с участием центральных контрагентов на глобальных финансовых рынках автора Норман Питер

9.2. Реакция США К тому времени, когда была опубликована статья Бернанке, центральные контрагенты в США уже предприняли шаги по устранению наиболее явных недостатков, которые обнаружились в ходе кризиса 1987 года. OCC заменила своего главного внешнего поставщика

РЕАКЦИЯ Из книги Том 5 автора Энгельс Фридрих

РЕАКЦИЯ Кёльн, 5 июня. Гладка дорога мертвецам. Г-н Кампгаузен отрекается от революции, а реакция осмеливается предложить согласительному собранию заклеймить ее, как бунт. На заседании 3 июня один из депутатов внес предложение воздвигнуть памятник солдатам, убитым 18

1. Цепная реакция урана и цепная реакция сенсаций Из книги Прометей раскованный автора Снегов Сергей Александрович

1. Цепная реакция урана и цепная реакция сенсаций Бор переоценил свои духовные силы, когда пообещал молчать, пока Фриш не опубликует своего с Мейтнер открытия. Пароход уже давал прощальный гудок, когда Бор с Эриком мчались по трапу наверх. На палубе их поджидал ассистент

Бордё Жюль Из книги Большая Советская Энциклопедия (БО) автора БСЭ 3.3.2. Острая стрессовая реакция (острая реакция на стресс, ОСР) Из книги Психиатрия войн и катастроф [Учебное пособие] автора Шамрей Владислав Казимирович

3.3.2. Острая стрессовая реакция (острая реакция на стресс, ОСР) ОСР представляет собой выраженное транзиторное расстройство, которое развивается у психически здоровых лиц как реакция на катастрофический (т. е. исключительный по силе физический или психологический) стресс

г. Последствия проповеди: смешанная реакция (13:42–52) Последовавшая реакция слушателей была положительной: Из книги Деяния святых Апостолов автора Стотт Джон

г. Последствия проповеди: смешанная реакция (13:42–52) Последовавшая реакция слушателей была положительной: При выходе их из Иудейской синагоги, язычники просили их говорить о том же в следующую субботу; 43 Когда же собрание было распущено, то многие Иудеи и чтители Бога,

5. «СЕНСОРНО-МОТОРНАЯ РЕАКЦИЯ. ДВИГАТЕЛЬНАЯ РЕАКЦИЯ БОКСЕРА НА ПОЯВЛЕНИЕ ВНЕШНЕГО РАЗДРАЖИТЕЛЯ» Из книги Его величество удар автора Камалетдинов Рашид

5. «СЕНСОРНО-МОТОРНАЯ РЕАКЦИЯ. ДВИГАТЕЛЬНАЯ РЕАКЦИЯ БОКСЕРА НА ПОЯВЛЕНИЕ ВНЕШНЕГО РАЗДРАЖИТЕЛЯ» В скоростном исполнении удара важная роль отводится на то, как боксер реагирует на появление внешнего раздражителя (звук, сигнал,загорание лампочки на динамометре перед

РСК отличается высокой чувствительностью и специфичностью и применяется для:

1) серологической диагностики инфекционных заболеваний (р. Вассермана – при сифилисе, р. Борде–Жангу – при хронической гонорее и др.);

2) идентификации бактерии и др. микробов.

РСК относится к сложным серологическим реакциям, в которых участвуют, кроме АГ и АТ, ещё гемолитическая система (р. гемолиза), выявляющая результат реакции.

РСК проводится в два этапа при участии двух систем:

1) первая система – АГ+АТ+комплемент – обуславливает связывание комплемента в том случае если АТ соответствует АГ. В случае же несоответствия АТ и АГ комплемент остаётся свободным;

вторая система (индикаторная) – гемолитеческая сыворотка (гемолизины) + эритроциты – показывает исход реакции в первой системе: в случае положительного результата реакции в первой системе (образования комплекса АГ+АТ+комплемент) во второй системе не произойдет гемолиза ввиду отсутствия комплемента (эритроциты оседают на дно пробирки). В случае отрицательного результата в первой системе вторая сопровождается гемолизом, т. к. образуется комплекс эритроциты + гемолизины + комплемент (см. прилож. 3, рис.7 и 8).

Компоненты реакции:

1) испытуемая сыворотка (предварительно инактивируют нагреванием при 56 0 С в течение 30 минут);

2) антиген (изготавливается из взвесей убитых микробов, лизатов микробов, полных АГ, гаптенов, экстрактов тканевых липидов);

3) комплемент;

4) гемолитическая сыворотка;

5) 3% взвесь эритроцитов барана;

6) физиологический раствор;

7) контрольная сыворотка.

Комплемент . В качестве комплемента в РСК применяют свежую и высушенную сыворотку морской свинки, т. к. в крови морской свинки комплемент содержится в наибольшем количестве и присутствует постоянно, чем у др. животных. Перед постановкой РСК следует проводить титрование комплемента в реакции гемолиза (эритроциты барана, гемолитическая сыворотка, комплемент, физ. раствор) и определение рабочей дозы.

Титр комплемента – наибольшее разведение комплемента которое вызывает полный лизис эритроцитов в присутствии гемолитической сыворотки.

Рабочая доза комплемента – количество комплемента, которое выше тира на 25%.

Гемолитическая сыворотка готовится путём иммунизации кроликов 50% взвесью эритроцитов барана. Полученную сыворотку инактивируют нагреванием при 56 0 С. Определяют титр и рабочую дозу.

Титр сыворотки – максимальное разведение сыворотки которое вызывает полный лизис эритроцитов в присутствии комплемента. В качестве рабочей дозы берут гемолитическую сыворотку в тройном титре.

РСК Борде –Жангу

Реакция ставится для диагностики хронической гонореи с целью обнаружения антител к гонококку.

В РСК участвует 2 системы: основная система – испытуемая сыворотка, антиген, комплемент и вспомогательная, индикаторная или гемолитическая система – гемолитическая сыворотка и эритроциты барана.

Если в первой системе образуются специфический комплекс антиген + антитело, то комплемент адсорбируется (соединяется с этим комплексом) и гемолиза во второй системе не происходит.

Для реакции требуется:

1. Испытуемая сыворотка, которая получается из крови, взятой пункцией локтевой вены больного. После свёртывания крови сыворотка отсасывается в отдельную пробирку и инактивируется 30 минут при 56 0 С на водяной бане.

2. Антиген - взвесь убитых гонококков.

3. Эритроциты барана получают из стерильно взятой дефибринированной крови. Их отмывают, центрифугируя 3 раза с новыми порциями физиологического раствора. В реакции используют 3 % взвесь эритроцитов.

4. Гемолитическая сыворотка готовится заранее путём иммунизации кроликов эритроцитами барана. Перед употреблением производится титрование сыворотки.

5. Комплемент - свежая сыворотка морской свинки. Из сердца морской свинки шприцем насасывается кровь, после свёртывания отделяется сыворотка. Перед опытом вытитровывается рабочая доза комплемента. Для этого берут основное разведение комплемента 1:10 и разливают его по пробиркам, от 0,1 до 0,5, после чего объем в каждой пробирке доводят физиологическим раствором до 1,5 мл.

Одновременно заготавливают гемолитическую систему - разведенная в тройном титре гемолитическая сыворотка + 3 % взвесь эритроцитов барана. Оба ингредиента в разных объемах и выдерживают в термостате 30 минут (сенсибилизация смеси), после чего смесь добавляют по 1 мл в пробирки помещают в термостат на 30 минут. Контролем служат 3 пробирки:

1. 1мл гемолитической системы + 1,5 мл физиологического раствора;

2. 0,5 мл комплемента 1:10 + 0,5 мл взвеси эритроцитов + 1,5 мл физиологического раствора.

Титром комплемента называется его минимальное количество, при котором ещё происходит гемолиз. Для постановления реакции берут рабочую дозу комплемента, увеличенную против титра на 20-25 % т. е., обычно то количество комплемента, которое имеется в предпоследней пробирке с гемолизом. Увеличение дозы комплемента необходимо потому, что в реакции активность комплемента может оказаться несколько подавленной другими ингредиентами реакции (антиген, сыворотка).

Постановка основного опыта РСК Борде - Жангу.

В начале в 2 пробирки разливается инактивированная и разведённая 1:5 испытуемая сыворотка. Затем в 1-ю пробирку приливается антиген, во вторую физиологический раствор. После этого во все пробирки добавляются рабочая доза комплемента.

После смешивания ингредиентов штатив с пробирками помещается в термостат при 37 0 С на 30 минут (горячее связывание). При холодном связывании штатив с пробирками помещается в ледник при температуре -4 0 С на 18 часов. После выдерживания в термостате во все пробирки добавляется гемолитическая система. Реакция ставится в объёме 0,5 мл. Пробирки снова помещают в термостат на 2 часа, после чего производится предварительная регистрация результатов. Пробирки остаются при комнатной температуре, а на следующий день отмечается окончательный результат.

Степень интенсивности реакции оценивается в плюсах. Полная задержка гемолиза - четыре плюса (++++), неполная - три, и один плюс. Полный гемолиз обозначается минусами (-).

РСК Вассермана

Ставится для диагностики сифилиса с целью обнаружения антител, а также для определения эффективности специфической терапии. Она основана на принципе реакции связывания комплемента Борде-Жангу. Существенным отличием реакции Вассермана является неспецифичность антигена: в качестве антигена употребляют липоидные экстраты из нормальных органов животных.

Для постановки реакции Вассермана необходимо иметь сыворотку больного, диагностикумы перекрестнореагирующие антигены № 1 и № 2, комплемент, гемолитическую сыворотку, эритроциты барана, физиологический раствор.

Диагностикум № 1 - специфический, трепонемный.

Диагностикум №2 - неспецифический, кардиолипиновый антиген, который представляют собой высокоочищенный экстракт бычьего сердца, имеющий постоянный химический состав липоидов. Липоиды, экстрагированные из сердца, по химическому составу близки к липоидам бледной трепонемы, поэтому хотя и не являются специфическими, но фиксируют антитела против спирохеты. Указанные антигены выпускаются централизованно и в реакцию употребляются, разведёнными согласно к титру, указанному на этикетке.

Одновременно с основным опытом ставят 2 контроля: с заведомо отрицательной и заведено положительной сыворотками.

Цена: 8 296.00 RUB

Вы можете добавить товар в корзину, указав количество

Производитель: HiMedia Laboratories

Страна: Индия

Ед. изм.: упаковка

Упаковка: 500г

Вид упаковки: полиэтиленовая банка

Артикул: M175-500G

Описание

Функциональное назначение

Пропись основана на питательной среде J.Bordet & O.Gengou , модифицированная Kendrick, и рекомендована специалистами АРНА для диагностики коклюша.
Картофельный настой и пептический перевар животной ткани являются источником углерода и азота, глицерин и кровь - дополнительными источниками питательных веществ. Ввиду богатого состава эти среды позволяют получать обильный рост бордетелл, их можно использовать для приготовления биомассы бактерий в ходе приготовления коклюшной вакцины или для сохранения лабораторных штаммов бордетелл. Обогащение среды 15% бараньей крови позволит выделить Bordetella pertussis по способности к гемолизу. Добавление 25% человеческой крови позволяет определить присутствие микобактерий в небольшом количестве мокроты, а также определить их чувствительность к стрептомицину.
Среды можно сделать селективными, если в их состав ввести антибиотик, например, пенициллин, метициллин или, что особенно рекомендуется, цефалексин (в концентрации 40 мкг/мл) . В качестве противогрибкового средства в среду можно добавить амфотерицин В (10 мкг/мл).
Ассортимент размещен в специализированном разделе

Технические характеристики

Состав, грамм/литр:
Картофельный настой 125,00;
Пептический перевар животной ткани 10,00;
Натрия хлорид 5,50;
Агар-агар 20,00.
Конечное значение рН (при 25°С) 6,7 ± 0,2.
Гомогенный сыпучий светло-желтый порошок. Готовая среда имеет светло-желтую окраску, прозрачна или слегка опалесцирует при затвердевании. По плотности соответствует 2% агаровому гелю. После добавления крови (15% об/об) среда должна иметь вишнево-красный цвет и опалесцировать.
Этикетка на упаковке на русском языке. Зарегистрировано в МЗ и СР РФ. Непрозрачные водоотталкивающие пластиковые флаконы с навинчивающимся колпачком, который имеет внутреннюю крышку, 0,5 кг/упак.
Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.
Этикетка на упаковке на русском языке, содержит инструкцию по применению, информацию об условиях хранения и дату срока годности, по истечении которого использованию не подлежит.
Зрегистрированно в Росздравнадзор РФ

116. Провокации при гонорее

Дополнительный метод исследования . Применяется в том случае, когда гонококков обнаружить не удается, а клиническая картина подозрительна на гонорею, а также как критерий качества терапии после ее окончания. Используют определенные методы воздействия на организм в целом и мочеполовой аппарат (главным образом на мочеиспускательный канал), что ведет к обострению имеющегося воспалительного процесса. После проведения провокации у больного в течение 3 дней берут материал для исследования на содержание гонококков. Применяют следующие виды провокации.

Алиментарная - назначение больному острой и соленой пищи, пива, в состав которого входит хмель, содержащий лопулин, выводящийся из организма преимущественно почками. Проходя через мочеиспускательный канал, он раздражает его слизистую оболочку.

Иммунобиологическая - внутримышечное введение 0,5 мл (500 млн. микробных тел) гонококковой вакцины. В последнее время провокацию с помощью гоновакцины комбинируют с внутримышечным введением 50-200 МПД пирогенала или продигиозана. Женщинам в стационарных условиях гоновакцину в дозе 50-100 млн. микробных тел вводят в шейку матки.

Механическая - введение в мочеиспускательный канал прямого бужа, размер которого соответствует размеру наружного отверстия мочеиспускательного канала. Вместо бужа можно использовать тубус уретроскопа Валентина, особенно в тех случаях, когда при дальнейшем исследовании необходимо сделать уретроскопию. Простерилизованный и охлажденный буж смазывают глицерином и вводят на 10 мин в мочеиспускательный канал, мужчинам - в передний его отдел. Затем производят легкий массаж мочеиспускательного канала на буже с целью получения секрета желез мочеиспускательного канала (рис. 13).

Химическая - введение в мочеиспускательный канал химических раздражающих веществ, чаще серебра нитрата (3-4 мл 0,5-1 % раствора у мужчин, 3-4 мл 1-2 % раствора - у женщин; 3-5 % раствор для смазывания канала шейки матки). Для раздражения слизистой оболочки шейки матки можно использовать раствор Люголя. Мазки после химической провокации лучше брать спустя 2-3 дня. В первые дни в выделениях из мочеиспускательного канала и канала шейки матки обнаруживают много
эпителиальных клеток отторженной слизистой оболочки, что часто затрудняет микроскопическое исследование (рис. 14).

Физиотерапевтическая, или термическая, - использование диатермии, реже - интравагинальных грязевых тампонов. Абдоминально-вагинально-сакральную диатермию назначают женщинам ежедневно по 30-40 мин в течение 3 дней. Мазки берут спустя 2 ч после каждой процедуры.

Физиологическая - взятие мазка у женщин из канала шейки матки во время менструации и в течение 3 дней после нее.

Рис. 13. Массаж мочеиспускательного канала на металлическом буже

Рис. 14. Инсталляция раствора в мочеиспускательный канал
На практике чаще всего используют комбинированную провокацию.

Мы считаем наиболее удачными комбинации: иммунобиологической и механической провокации - у мужчин; иммунобиологической, термической и физиологической - у женщин.

Первую провокацию обычно проводят спустя неделю после окончания лечения, следующую - через месяц.

Следует отметить, что отрицательные результаты провокации не всегда могут служить неоспоримым критерием излеченности.

117. Пункция лимфатического узла

Производится при подозрении на сифилис в серонегативный первичный период в случаях, когда при исследовании тканевой жидкости поверхности шанкра не выявлены бледные трепонемы или когда из-за фимоза исследование ее невозможно. Данную манипуляцию производят также у тех больных, у которых к моменту обращения их к врачу наступила эпителизация эрозивного шанкра.

Исследуют регионарный склераденит, кожу над которым обрабатывают раствором йода спиртовым 5 %. Затем шприцем емкостью 2 или 5 мл с хорошо притертым поршнем и короткой толстой иглой делают прокол в центре бубона по его длинной оси на глубину 1-1,5 см. Производят энергичный массаж узла с постепенным извлечением из него иглы и поднятием поршня.

Если игла была введена правильно, то в пунктате должны быть лимфоциты.

Взятую таким способом жидкость исследуют под микроскопом в темном поле зрения (см. № 68).

При наличии сифилиса и правильной технике выполнения пункции бледную трепонему обнаруживают в 80-85 % случаев.
118. Пункция поясничная

Пункция поясничная, или взятие спинномозговой жидкости, является малым оперативным вмешательством и поэтому должна проводиться в условиях строгого соблюдения правил асептики и антисептики. Для ее проведения необходимо иметь стерильный материал: салфетки, шарики из ваты, раствор Люголя, этиловый спирт 96 %, пинцет или палочки, клеол, специальные простерилизованные кипячением пункционные иглы с мандренами. Диаметр иглы 1,5-0,4 мм, длина -8-12 см. Лучше пользоваться иглой диаметром 0,5-0,6 мм, что уменьшает травматичность процедуры. Поясничную пункцию делают в положении больного сидя или лежа . Мы считаем более удобным первый вариант. Полуобнаженного больного усаживают на край стола или лучше на высокую тумбочку. Под ноги ставят высокий табурет с таким расчетом, чтобы колени были максимально приближены к животу. Больного просят сложить руки на животе, голову наклоняют вперед так, чтобы подбородок касался груди, при этом спина выгибается в виде дуги, туловище не должно быть наклонено вниз. При таком положении остистые отростки позвонков максимально раздвигаются, оставляя место для введения иглы. Место прокола выбирают между IV и V или III и IV поясничными позвонками. Палочкой с намотанной на ее конец ватой, смоченной в растворе Люголя, проводят горизонтальную линию, соединяющую верхние края гребней подвздошных костей (линия Якоби). Пересечение этой линии с вертикальной линией, проходящей через середину остистых отростков, и будет соответствовать месту прокола (рис. 15). При прощупывании выявляют незначительное западение. В этом месте ногтем ставят знак в виде креста (место прокола). Врач тщательно моет руки с мылом, высушивает стерильными тампонами, смазывает раствором Люголя и тщательно протирает этиловым спиртом. Кожу больного смазывают раствором Люголя или раствором йода спиртовым 5 %, затем энергично протирают этиловым спиртом и высушивают стерильным марлевым тампоном. Внутрикожно вводят до образования «лимонной корки» 0,5-1 мл 1 % раствора новокаина с целью анестезии, особенно больным с лабильной нервной системой . Через 1-2 мин пункционную иглу вводят непосредственно под остистый отросток IV поясничного позвонка по средней линии, медленно продвигая ее вперед и несколько вверх. Правой руке врача, которая является как бы направляющей, помогает левая, проталкивая иглу вперед. Продвинув иглу на 4-5 см, врач ощущает небольшой хруст (прокол желтой связки), после этого извлекает мандрен, и из иглы начинает вытекать спинномозговая жидкость. В норме она прозрачная, вытекает каплями, которые можно сосчитать. Если жидкость вытекает струей, то это свидетельствует о повышенном давлении в спинномозговом канале. 3-4 мл жидкости собирают в две стерильные пробирки и направляют в лабораторию на исследование. Ватой, смоченной этиловым спиртом, придерживают кожу у основания иглы и медленными винтообразными движениями извлекают ее. Место прокола смазывают раствором йода спиртовым 5 % и накладывают стерильную коллоидную повязку.

Рис. 15. Схема спинномозговой пункции

После пункции больного осторожно укладывают в горизонтальном положении в постель животом вниз и не разрешают двигаться в течение 3-4 ч. Затем можно поворачиваться в постели, желательно не вставать в течение суток . Больным с лабильной нервной системой дают седативные препараты (хлозепид, или элениум, триоксазин, препараты брома, валерианы). С целью профилактики возможных осложнений - раздражения мозговых оболочек - в последующие 2-3 дня внутривенно вводят 5-10 мл 40 % раствора гексаметилентетрамина (уротропина).

Исследование спинномозговой жидкости является необходимым условием для правильной диагностики, выбора тактики лечения и оценки его эффективности при сифилисе. К сожалению, многие врачи недооценивают практическую важность этого метода. В спинномозговой жидкости определяют содержание белка (норма -до 0,4 %), подсчитывают количество форменных элементов (норма - менее 8 клеток),

проводят реакции: Нонне - Апельта и Панди (норма ++), одну из коллоидных (лучше с золота хлоридом), Вассермана в разведениях 0,1; 0,25; 0,5 при наличии в пробирке 2,5 мл жидкости. По возможности ставят реакцию иммунофлюоресценции (РИФ) и реакцию иммобилизации бледных трепонем (РИБТ). Реакцию Вассермана (с кардиолишшовым и липидным антигенами), РИФ и РИТ проводят общепринятыми методами (см. №119, 121, 123, 124).
119. Реакции Панди и Нонне - Апельта

В качестве реактива для проведения реакции Панди используют надосадочную прозрачную жидкость, которую получают при сильном взбалтывании 100 г жидкой карболовой кислоты с 1000 мл дистиллированной воды. Для получения осадка и прозрачной жидкости (реактива) данную смесь помещают сначала на 3-4 ч в термостат , а затем 2-3 дня выдерживают при комнатной температуре.

Часовое или предметное стекло кладут на темную бумагу и наносят на него 2-3 капли реактива, затем 1 каплю спинномозговой жидкости. При помутнении капли или появлении нитевидной мути по ее периферии реакцию считают положительной.

Для проведения реакции Нонне - Апельта необходимы чистые пробирки, насыщенный раствор аммония сульфата, дистиллированная вода, темная бумага. Насыщенный раствор аммония сульфата готовят следующим образом: в колбу емкостью 1000 мл помещают 0,5 г химически чистого нейтрального аммония сульфата, затем наливают 100 мл дистиллированной воды, подогретой до 95 °С, взбалтывают до полного растворения соли и оставляют на несколько дней при комнатной температуре. Спустя 2-3 дня раствор фильтруют и определяют рН. Реакция должна быть нейтральной.

В пробирку наливают 0,5-1 мл полученного раствора и осторожно по стенке пробирки добавляют такое же количество спинномозговой жидкости. Через 3 мин оценивают результат. Появление беловатого кольца свидетельствует о положительной реакции. Затем содержимое пробирки взбалтывают, определяют степень помутнения, сравнивая с пробиркой, содержащей дистиллированную воду. Результаты реакции оценивают на фоне черной бумаги.
120. Реакция Борде - Жангу

Ценный диагностический тест при выявлении хронической гонореи среди лиц, страдающих хроническими воспалительными заболеваниями мочеполовой системы. По данным литературы, при правильном использовании этого метода выявляют до 80 % случаев гонореи, не обнаруженной бактериоскопическим или бактериологическим методом.

Реакция Борде - Жангу может быть следовой в результате перенесенного ранее заболевания или применения гоновакцины с диагностической (иммунобиологический метод провокации), а также лечебной (лечение хронических воспалительных процессов мочеполовой системы у женщин по Бакшееву) целью. Поэтому перед ее проведением необходимо тщательно собрать анамнез,

Реакция может быть и ложноположительной при введении молока, использовании в лечебных целях пирогенала.

Следовательно, положительная реакция Борде - Жангу не служит бесспорным доказательством наличия гонококковой инфекции, как и отрицательная не может быть свидетельством отсутствия гонореи. Однако положительные результаты ее в течение длительного времени должны нацелить врача на поиск очага гонококковой инфекции в организме.

В качестве антигена используют убитую гонококковую культуру, содержащую 3-4 млрд. микробных тел в 1 мл. Гонококковый антиген консервируют раствором формальдегида и разливают в ампулы по 1- 5 мл. Не вскрытые ампулы пригодны в течение 6 мес, вскрытые можно сохранять 2-3 дня в стерильной пробирке в холодильной камере при температуре 3-5 °С,

Реакцию связывания комплемента Борде - Жангу проводят аналогично реакции Вассермана (см. № 121). Гонококковый антиген разводят изотоническим раствором натрия хлорида соответственно указанному на этикетке ампулы титру. Реакцию проводят чаще всего в объеме 2,5 мл, поэтому к 0,5 мл разведенной 1: 5 испытуемой сыворотки добавляют в каждую пробирку по 0,5 мл разведенного антигена. Остальные 1,5 мл составляют 1 мл гемолитической системы и 0,5 мл комплемента.

Реакцию считают положительной при наличии выраженной в разной степени задержки гемолиза в испытуемой сыворотке. В контроле (сыворотка крови здоровых людей) наблюдается полный гемолиз.

121. Реакция Вассермана

В сыворотке крови больных сифилисом находятся реагины и антитела. Реагины обладают свойством вступать в соединения с кардиолипиновым антигеном. Специфические антитела против бледной трепонемы вступают в соединение со специфическими антигенами. Образовавшиеся комплексы антиген - антитело сорбируют добавляемым в реакцию комплементом . Индикацию производят путем введения гемолитической системы (эритроциты барана + гемолитическая сыворотка).

Для проведения реакции требуются:

а) изотонический раствор натрия хлорида;

б) ультраозвученный трепонемный (хранят в холодильнике при температуре +4 °С) и кардиолипиновый (хранят при комнатной температуре) антигены;

в) комплемент, представляющий собой сыворотку крови, полученной при пункции сердца 5-10 здоровых гвинейских свинок. Может сохраняться в холодильнике в течение 2 мес при условии

консервирования 4 % раствором борной кислоты и 5 % раствором натрия Сульфата;

г) гемолизин - гемолитическая сыворотка крови кролика, иммунизированная эритроцитами барана с разными титрами (хранят в холодильнике при температуре 4 °С);

д) эритроциты барана, получаемые пункцией яремной вены. Кровь собирают в стерильную банку со стеклянными шариками (для перемешивания), встряхивают 15 мин. Сгустки фибрина отделяют фильтрованием через стерильную марлю. Дефибринированную кровь можно хранить в холодильнике до 5 сут.
Иногда возникает необходимость более длительного хранения крови барана, в связи с чем ее консервируют специальным консервантом (6 г глюкозы, 4,5 г кислоты борной, 100 мл изотонического раствора натрия хлорида), который кипятят на водяной бане по 20 мин в день в течение 3 сут. На 100 мл дефибринированной крови барана требуется 15 мл консерванта. Консервированную таким образом дефибринированную кровь хранят в холодильнике.
Проведению основного опыта предшествует несколько этапов.

У больного из локтевой вены берут 5-10 мл крови и обрабатывают сыворотку. У детей кровь можно взять из височной вены или разреза на пятке. Пункцию делают стерильными инструментами, шприц и иглу
предварительно промывают изотоническим раствором натрия хлорида.

Кровь для исследования берут натощак; за 3-4 дня до исследования больному запрещают употреблять наркотические средства, препараты наперстянки, принимать алкоголь.

Не следует проводить исследование у больных с повышенной температурой тела, после травмы, операции, наркоза, перенесенных недавно инфекционных заболеваний, у женщин во время менструации, у беременных (в последние 10 дней беременности), рожениц (в первые 10 дней после родов), а также новорожденных (в первые 10 дней жизни).

Полученную кровь в стерильной пробирке помещают на 15-30 мин в термостат при температуре 37 °С. Образовавшийся сгусток отделяют от стенок пробирки стерильной стеклянной палочкой и ставят в холодильник на сутки. Отделившуюся прозрачную сыворотку (над сгустком) отсасывают пастеровской пипеткой с помощью резиновой груши либо осторожно сливают в другую стерильную пробирку и инактивируют на водяной бане в течение 30 мин при температуре 56 °С. Приготовленную таким образом для опыта сыворотку можно хранить в холодильнике до 5-6 дней.

Антигены разводят соответственно способу и титру, указанным на этикетке.

Приготавливают гемолитическую систему. Для этого дефибринированную кровь или эритроциты барана в количестве , необходимом для проведения реакции, центрифугируют, плазму осторожно отделяют, а осадок промывают 5-6 объемами изотонического раствора натрия хлорида до тех пор, пока надосадочная жидкость не станет совершенно бесцветной. Из осадка готовят 3 % взвесь эритроцитов в изотоническом растворе натрия хлорида по утроенному титру.

Раствор гемолитической сыворотки и взвесь эритроцитов барана быстро смешивают и помещают в термостат на 30 мин.

Сухой комплемент разводят изотоническим раствором натрия хлорида в пропорции 1:10, нормальную инактивированную сыворотку человека- 1:5.

Комплемент титруют в 30 пробирках, помещенных в штатив по 10 пробирок в 3 ряда. В двух рядах его титруют в присутствии двух антигенов, в третьем - с изотоническим раствором натрия хлорида. Пять пробирок являются контрольными: две для соответствующих двух антигенов и по одной - для контроля комплемента, гемолитической сыворотки и изотонического раствора натрия хлорида на гемотоксичность; заполняют их следующим образом:

Реактивы, мл	Ряд пробирок
	1-й	2-й	3-й	4-й	5 и
3 % взвесь эритроцитов барана	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25
Гемолитическая сыворотка, разведенная по утроенному титру	-	0,25	-	-	-
Комплемент 1:10	0,25	-	-	-	-
Трипонемный антиген, разведённый по титру	-	-	-	-	-
Кардиолипиновый антиген, разведённый по титру	-	-	-	-	0,5
Изотонический раствор натрия хлоприда	0,75	0,75	1,0	0,5	0,5

Пробирки помещают на 45 мин в термостат, после чего их проверяют. Гемолиза не должно быть ни в одной пробирке.

Комплемент в разведении 1:10 разливают в 10 пробирок 1-го ряда штатива в дозах: 0,1, 0,16, 0,2,0,24, 0,3, 0,36,0,4,0,44, 0,5 и 0,55 мл. К содержимому каждой пробирки добавляют изотонический раствор натрия хлорида до 1 мл и тщательно перемешивают. По 0,25 мл смеси из каждой пробирки переносят в соответствующие пробирки 2-го и 3-го рядов. Штатив с пробирками встряхивают, в 3-й ряд пробирок добавляют по 0,5 мл гемолитической системы, вновь встряхивают и помещают на 45 мин в термостат при температуре 37 °С. Нормальную сыворотку крови человека, разведенную изотоническим раствором натрия хлорида в пропорции 1:5, по 0,25 мл разливают во все 30 пробирок.

Антиген I (трепонемный ультраозвученный), разведенный по титру изотоническим раствором натрия хлорида, по 0,25 мл добавляют в 10 пробирок 1-го ряда; антиген II (кардиолипиновый в том же разведении и в том же количестве) - в 10 пробирок 2-го ряда. В 10 пробирок 3-го ряда приливают по 0,25 мл изотонического раствора натрия хлорида, оставшиеся 0,25 мл выливают. После инкубации в термостате в 20 пробирок (1-го и 2-го ряда) добавляют по 0,5 мл гемолитической системы, встряхивают и повторно помещают в термостат на 45 мин.

Через 45 мин определяют рабочую дозу комплемента, то есть титр его с надбавкой в пределах 15-20 %.

Титром комплемента считают его минимальное количество, вызывающее полный гемолиз эритроцитов барана в присутствии антигена и нормальной сыворотки крови человека.

Основной опыт заключается в том, что каждую испытуемую инактивированную сыворотку, разведенную в пропорции 1: 5 изотоническим раствором натрия хлорида, разливают по 0,25 мл в три пробирки. В первую пробирку добавляют 0,25 мл антигена I, во вторую - 0,25 мл антигена II, в третью (контроль) -0,25 мл изотонического раствора натрия хлорида. Во все пробирки добавляют также по 0,25 мл разведенного до рабочей дозы комплемента. Все пробирки помещают на 45 мин в термостат, затем в них добавляют по 0,5 мл гемолитической системы, встряхивают и ставят в термостат на 45-50 мин. Результат опыта регистрируют после наступления полного гемолиза в контрольных пробирках.

Результаты реакции оценивают плюсами: полная задержка гемолиза (резкоположительная реакция) ++++, значительная (положительная реакция) +++, частичная (слабоположительная реакция) ++, незначительная (сомнительная реакция) - ±, отсутствие задержки гемолиза (отрицательная реакция) -.

При количественном методе проведения реакции Вассермана опыт ставят с уменьшающимися объемами сыворотки, разведенной изотоническим раствором натрия хлорида.
Схема проведения основного опыта реакции Вассермана

Ингредиенты (в мл). Общий объем 1,25 мл	№ пробирок
	I	Ц	III
Испытуемая сыворотка инактивированная, разведенная в пропорции 1: 5 Антиген I (трепонемный), разведенный по титру Антиген II (кардиолипиновый), разведенный по титру Изотонический раствор натрия хлорида Комплемент, разведенный по рабочей дозе	0,25 0,25	0,25	0,25
	-	0,25	-
	0,25	0,25	0,25 0,25

Клиническое значение реакции Вассермана трудно переоценить. Ее проводят всем больным до начала лечения, но особое значение она имеет при скрытом сифилисе, поражении внутренних органов и нервной системы.

Результаты реакции Вассермана характеризуют качество проведенного лечения , что дает основание в определенные сроки снимать с учета лечившихся больных.

При первичном сифилисе реакция Вассермана положительная обычно в конце 6-й недели с момента заражения; при вторичном свежем сифилисе она положительная почти в 100 % случаев, при вторичном рецидивном -в 98-100%; третичном активном - в 85%; третичном скрытом - в 60 % случаев.

Реакцию Вассермана проводят двукратно всем беременным, больным с соматическими, нервными, психическими и кожными болезнями, а также декретируемым контингентам населения. В то же время к.положительным и слабоположительным результатам реакции следует относиться критически, так как они могут быть в конце беременности и после родов, при гипертиреозе, малярии, проказе, распаде злокачественной опухоли, инфекционных заболеваниях, коллагенозах и др. Поэтому при наличии клинических проявлений болезни их следует учитывать, наряду с данными бактериоскопии, в первую очередь.

Вместе с тем имеются факторы , которые могут исказить истинный характер полученных результатов реакции Вассермана: плохо вымытая лабораторная посуда (следы кислоты и щелочи в пробирках), длительное хранение крови, взятой для исследования, употребление больными жиров и алкоголя перед обследованием, период менструации и др.